Создание первичных культурах фибробластов взрослых от грызунов
Summary
В этой статье описывается протокол для изоляции и обслуживание первичных культурах фибробластов из кожи и ткани легких диких грызунов.
Abstract
Важность использования первичных элементов, а не линии раковых клеток, для биологических исследований становится широкое признание. Первичные элементы являются предпочтительными при исследовании клеточного цикла управления, апоптоза и репарации ДНК, как раковые клетки нести мутации в генах, участвующих в этих процессах. Первичные элементы не могут быть культурными бесконечно из-за наступления старения репликативной или aneuploidization. Таким образом, новые культуры должны быть созданы на регулярной основе. Процедура выделения грызунов эмбриональных фибробластов хорошо известна, но изоляция взрослых культур фибробластов часто представляет проблему. Взрослых фибробластов грызунов изолированы от мышиных моделях болезни человека может быть предпочтительным контроль при сравнении их от человеческих фибробластов пациентов. Кроме того, взрослые фибробласты только материал при работе с дикими грызунами, где беременные самки не могут быть легко получены. Здесь мы предлагаем протокол для изоляции и культуры взрослых фибробластов из кожи грызунов и легких. Мы использовали эту процедуру успешно изолировать фибробластов из более чем двадцати видов грызунов от лабораторных мышей и крыс диких грызунов, таких как бобр, дикобраз, и белки.
Protocol
Discussion
Нормальная первичных фибробластов обеспечивают прекрасную альтернативу установленном раковых клеток линий в биологических исследованиях. Важным преимуществом является то, что фибробласты, они не несут мутации онкогенов и опухолевых супрессоров и сохранить нетронутым контрольно-п?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим д-р Стивен Austad за предоставление первой версии этого протокола. Эта работа была поддержана грантами NIH и Эллисон Медицинский фонд В. Г. и А. С.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM/F12 media | Invitrogen | 11330-032 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified | Invitrogen | 01437-036 | The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts. | |
| Antibiotic/Antimycotic | Invitrogen | 15420-096 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Liberase TM Research Grade | Roche | 05401127001 | Replacement enzyme. | |
| A note from the authors: Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 – 10 mg, Cat. no. 05401127001 – 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues. | ||||
| EMEM media | ATCC | 30-203 | The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate. | |
| Feathered #21 disposable, sterile scalpel | Multiple suppliers | |||
| Three Gas Control incubator | Forma or Heraeus |
Referenzen
- Seluanov, A. Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging . Cell. 7, 813-823 (2008).
- Parrinello, S. Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts. Nat Cell Biol. 5, 741-747 (2003).
