Para avaliar a<em> In vivo</em> Efeitos de intervenções terapêuticas para doenças musculares, são necessários métodos para quantificar a geração de força e cansaço no músculo tratado. Detalhamos uma abordagem para avaliar mio-mecânicas no músculo de rato explantado hindlimb. Esta análise proporciona uma abordagem robusta para quantificação dos efeitos da modificação genética na função muscular, bem como a comparação de tratamentos em modelos do rato da doença muscular.
Para avaliar os efeitos in vivo de intervenções terapêuticas para o tratamento da doença muscular 1,2,3, métodos quantitativos são necessários a medida da força e fadiga no músculo tratado. Descrevemos uma abordagem detalhada para avaliar mio-mecânicas em recém-explantado muscular hindlimb do mouse. Descrevemos a colheita atraumática do mouse músculo longus extensor dos dedos, a montagem do músculo em um músculo strip myograph (Modelo 820MS; Tecnologia Myo dinamarquês), ea medição da contração máxima e tensão tetânica, tempo de contração e relaxamento meia-hora, usando um quadrados de pulso estimulador (Modelo S48; Technologies Grass). Usando essas medidas, demonstramos o cálculo da contração muscular específica e tensão tetânica normalizada para a área muscular transversal, a contração-a-tetânica relação de tensão, a curva de relação força-freqüência ea curva de fadiga de baixa freqüência 4. Esta análise fornece um método para comparação quantitativa entre as intervenções terapêuticas em modelos do rato da doença muscular 1,2,3,5, bem como comparação dos efeitos de modificação genética em função muscular 6,7,8,9.
Descrevemos uma abordagem detalhada para avaliar mio-mecânicas no músculo explantado hindlimb do mouse. A EDL, enquanto mais difícil de dissecar por causa de sua posição posterior atrás do músculo tibial anterior, é mais fácil de avaliar que o tibial anterior devido à sua proeminente anexos tendinosa ao tornozelo e joelho. Esses tendões facilitar a montagem na myograph strip muscular. Em contraste, a mais facilmente acessada tibial anterior tem um anexo, ampla quase atendinous na articulação do joelho, tornando-se extremamente difícil tanto para dissecar, sem comprometer o músculo, e montar com segurança no myograph. Destacamos ainda que rapidamente a montagem do músculo em um banho de oxigenada em solução fisiológica e temperatura é essencial para preservar as propriedades mecânicas do músculo. Descobrimos que podemos repetir esta análise para até 30 minutos sem mudanças significativas na resposta do músculo sob essas condições. Finalmente, é essencial que as fibras musculares não ser tocado durante a dissecção e processos de montagem, pois isso pode ter efeitos adversos sobre a função muscular, e resultam em subestimação de mio-mecânico força. Seguindo estes procedimentos, esta análise fornece uma abordagem robusta quantitativa para avaliar os efeitos da modificação genética na função muscular 6,7,8,9, bem como a comparação entre intervenções terapêuticas em modelos do rato da doença muscular 1,2,3,5 .
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado por um Serviço de Saúde Pública Grant (HL086513) de NHLBI a PEO, e uma bolsa de pesquisa abrangente do Instituto de Medicina Regenerativa da Califórnia (RC1-00104), um Serviço de Saúde Pública Grant (HL085377) de NHLBI, e um presente da Fundação Pollin para HSB
SC foi apoiado por uma California Institute for Bridges Medicina Regenerativa de Stem Prêmio Célula de Investigação (TB1-01194) para San Francisco State University.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
5-0 silk sutures | Oasis | MV682 | General surgery | |
Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | General surgery | |
Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
Lab Chart software | ADInstruments | Version 7 | Data analysis | |
Muscle Strip Myograph | DMT | 820MS | Tension transduction | |
Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
Oscilloscope | EZ | OS-5020 | Tension stimulation | |
Pentobarbital, sodium salt | Sigma | P3761 | Euthanasia | |
PowerLab | ADInstruments | 8/30 | Data acquisition | |
Square Pulse Stimulator | Grass Tech. | S48 | Tension stimulation | |
Vannas spring scissors | WPI | 14003 | General surgery |
Solutions and Media
Lactated Ringer’s solution
Krebs Henseleit solution
Pentobarbital