Para evaluar la<em> In vivo</em> Efectos de las intervenciones terapéuticas para la enfermedad de los músculos, los métodos son necesarios para cuantificar la generación de fuerza y fatiga en el músculo tratado. Se detalla un método para la evaluación de myo-propiedades mecánicas de los músculos explantados extremidad posterior del ratón. Este análisis proporciona un enfoque sólido para la cuantificación de los efectos de la modificación genética en la función muscular, así como la comparación de las terapias en modelos de ratón de la enfermedad muscular.
Para evaluar los efectos in vivo de las intervenciones terapéuticas para el tratamiento de enfermedades musculares 1,2,3, los métodos cuantitativos son necesarios para medir la fuerza y la generación de fatiga en el músculo tratado. Se describe un enfoque detallado para la evaluación de myo-propiedades mecánicas en el músculo recién explantados extremidad posterior del ratón. Se describe la cosecha atraumática del ratón músculo extensor largo de los dedos, el montaje del músculo en el músculo tira miografía (Modelo 820MS, Danés de Tecnología Myo), y la medición de la contracción máxima y la tensión tetánica, el tiempo de contracción y relajación de medio tiempo, con un pulso cuadrado estimulador (modelo S48, Tecnologías de la hierba). El uso de estas mediciones, se demuestra el cálculo de la contracción específica y la tensión muscular tetánica normalizado a la sección transversal, el tic-a-tetánica relación de tensión, la curva de la relación fuerza-frecuencia y la curva de la fatiga de baja frecuencia 4. Este análisis proporciona un método de comparación cuantitativa entre las intervenciones terapéuticas en modelos de ratón de la enfermedad del músculo 1,2,3,5, así como la comparación de los efectos de la modificación genética en la función muscular 6,7,8,9.
Se describe un enfoque detallado para la evaluación de myo-propiedades mecánicas de los músculos de las extremidades traseras explantados el ratón. La EDL, aunque más difícil de diseccionar, debido a su posición posterior por detrás del músculo tibial anterior, es más fácil de evaluar que el tibial anterior, debido a sus anexos tendinosas prominente en el tobillo y la rodilla. Estos tendones facilitar el montaje en la miografía tira del músculo. Por el contrario, el de más fácil acceso tibial anterior tiene un archivo adjunto amplio, casi atendinous en la articulación de la rodilla, por lo que es sumamente difícil tanto para diseccionar sin comprometer el músculo, y montar de forma segura en la miografía. También señalan que aumentan rápidamente el músculo en un baño de oxigenados en tampón fisiológico y la temperatura es fundamental para conservar las propiedades mecánicas del músculo. Hemos encontrado que podemos repetir este análisis para un máximo de 30 minutos, sin cambios significativos en la respuesta del músculo en estas condiciones. Por último, es esencial que las fibras musculares no se toca durante la disección y los procedimientos de montaje, ya que esto puede tener efectos adversos sobre la función muscular, y el resultado de la subestimación de myo-mecánica de la fuerza. Siguiendo estos procedimientos, el análisis proporciona una aproximación cuantitativa sólida para evaluar los efectos de la modificación genética en la función muscular 6,7,8,9, así como la comparación entre las intervenciones terapéuticas en modelos de ratón de la enfermedad del músculo 1,2,3,5 .
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por un Servicio de Salud Pública Grant (HL086513) del NHLBI para PEO, y una beca de investigación integral en el Instituto de Medicina Regenerativa de California (RC1-00104), un Servicio de Salud Pública Grant (HL085377) del NHLBI, y un regalo de la Fundación Pollin de HSB
SC fue apoyado por un Instituto de California para la Medicina Regenerativa puentes para detener el Premio de Investigación Celular (TB1-01194) de San Francisco State University.
Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
5-0 silk sutures | Oasis | MV682 | General surgery | |
Dupont #5 forceps | WPI | 500233 | General surgery | |
Hemostat, straight | WPI | 501241 | General surgery | |
Iris forceps | WPI | 15914 | General surgery | |
Lab Chart software | ADInstruments | Version 7 | Data analysis | |
Muscle Strip Myograph | DMT | 820MS | Tension transduction | |
Operating scissors | WPI | 501754 | General surgery | |
Oscilloscope | EZ | OS-5020 | Tension stimulation | |
Pentobarbital, sodium salt | Sigma | P3761 | Euthanasia | |
PowerLab | ADInstruments | 8/30 | Data acquisition | |
Square Pulse Stimulator | Grass Tech. | S48 | Tension stimulation | |
Vannas spring scissors | WPI | 14003 | General surgery |
Solutions and Media
Lactated Ringer’s solution
Krebs Henseleit solution
Pentobarbital