Eine automatisierte Myographie Methode zur Kraftmessung in isolierten mesenterialen Arterien beschrieben. Es beschäftigt Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myographions 510A, um Antworten auf Phenylephrin und extrazelluläres Calcium zu bestimmen. Die Methode ermöglicht eine konsistente Bestimmung der isometrischen Antworten auf Agonisten in kleinen Gefäßen mit einem Durchmesser von 60 bis 300 um, unabhängig.
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Methodenartikel
A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Proximal Widerstand Schiffe, wie die Arteria mesenterica, tragen wesentlich zu den peripheren Widerstand. Diese kleinen Schiffe zwischen 100-400 um Durchmesser Funktion in erster Linie bei der Leitung der Blutfluss zu den verschiedenen Organen nach den allgemeinen Vorschriften des Körpers. Die Ratte A. mesenterica hat einen Durchmesser von mehr als 100 um. Die Myographie Technik, die zuerst von Mulvay und Halpern 1 beschrieben, wurde die Methode durch Bevan und Osher 2 vorgeschlagen basiert. Die Technik bietet Informationen über kleine Gefäße unter isometrischen Bedingungen, in denen wesentliche Verkürzung der Muskel-Präparat wird verhindert. Da die Kraft der Produktion und der Empfindlichkeit der Gefäße auf verschiedene Agonisten ist abhängig vom Ausmaß der Dehnung, nach aktive Spannung Länge Zusammenhang ist es wichtig, zu einer Kontraktion Studien unter isometrischen Bedingungen durchzuführen, um die Einhaltung der Montage Drähte zu verhindern. Edelstahl Drähte sind mit Wolfram-Drähten aufgrund der Oxidation des letzteren, die aufgezeichneten Antworten 3 betrifft bevorzugt. Die Technik ermöglicht den Vergleich der Agonisten-induzierten Kontraktionen montiert Schiffe, Beweise für die normale Funktion der glatten Gefäßmuskelzellen Rezeptoren zu erhalten.
Wir haben in mehreren Studien gezeigt, dass isolierte mesenterialen Arterien, die mit phenylyephrine zusammengezogen sind bei der Zugabe von kumulativen Konzentrationen von extrazellulärem Calcium (Ca 2 + e) zu entspannen. Die Ergebnisse führten uns zu, dass perivaskulären sensorischen Nerven, die die G-Protein-gekoppelten Ca 2 +-Sensing-Rezeptor (CAR) zum Ausdruck zu schließen, vermitteln diese Vasorelaxation Antwort. Mit einer automatisierten Draht Myographie Methode zeigen wir hier, dass Mesenterialarterien von Wistar, Dahl Salz-und Kleinschreibung (DS) und Dahl salzresistente (DR) Ratten reagieren unterschiedlich auf die Ca 2 + e. Gewebe von Wistar-Ratten zeigten höhere Ca 2 +-Sensitivität im Vergleich zu denen von DR und DS. Reduzierte CaR Ausdruck in Mesenterialarterien von DS Ratten korreliert mit reduzierten Ca 2 + e-induzierte Relaxation von isolierten, pre-Vertrag Arterien. Die Daten deuten darauf hin, dass das Auto für Entspannung Mesenterialarterien unter erhöhtem adrenerge Ton erforderlich ist, wie es bei Bluthochdruck und zeigen einen angeborenen Defekt in der Car-Signalweg in Dahl Tiere, die viel schwerer in DS ist.
Die Methode ist hilfreich bei der Bestimmung Gefäßreaktivität ex vivo in mesenterialen Widerstand Arterien und ähnliche kleine Blutgefäße und Vergleiche zwischen verschiedenen Agonisten und / oder Antagonisten können einfach und konsistent bewertet werden Side-by-side 6,7,8.
Protokoll
1. Isolierung von Ratten mesenterialen kleinen Arterie
- Anesthetize Tier mit Isofluran in einer geschlossenen Kammer, und wischen Sie den Bauch mit Alkohol.
- Führen Sie eine mid-line Laparotomie zu mesenterialen Bett aussetzen.
- Mit einer Schere entfernen ca. 85 cm des Darms mit der Fütterung Gefäßsystem mit der A. mesenterica superior. Schneiden Sie das proximale Ende der Darmabschnitt in der Nähe des Pylorus und das distale Ende in der Nähe des ileo-coecal Kreuzung. Segmente des Darms von Ratten, die tief mit Isofluran und eingeschläfert durch offenen Brustkorb Herzpunktion isoliert sind.
- Platziert herausgeschnitten Abschnitt i....
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Diskussion
Bluthochdruck ist eine der Hauptursachen für Herz-Kreislauf-, Hirn-und renale Morbidität / Mortalität. Das Auftreten von Bluthochdruck ist hoch in der Bevölkerung und Salz-sensitive Bluthochdruck ist besonders hoch in der Alterung der Bevölkerung, und häufiger in Schwarze als Weiße. Dies ist vermutlich darauf zurückzuführen sein, die Tendenz der Schwarzen zu Natrium in den Nieren 9 behalten. Salz-Sensitivität ist ein wesentlicher Faktor für Nierenerkrankungen und ist mit einer endothelialen Dysfunktion assozi.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Das beschriebene Projekt wurde von Preis Numbers R01 HL064761, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 und P20 MD000175 Form National Institutes of Health unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Meinung der National Institutes of Health.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Gerätes / Reagenz | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare (optional) |
| Auto Dual Wire Myographions System-510A DMT-USA, Inc. | Atlanta, GA. | 100151 | |
| PowerLab/4SP Data Acquisition System | ADInstruments, Colorado Springs, CO | ML750 | Neue Modelle mit 4-16 Eingangskanäle zur Verfügung. |
| Dell Dimension XPS Gen 4 Computer | Dell | ||
| Stemi SV II (Apo) Präparation Mikroskop mit Ocular | Carl Zeiss International. | ||
| Wistar, Dahl Salz-und Kleinschreibung, Dahl Salz-resistenten Ratten | Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN. | ||
| Rodent Chow | Harland Tekland, Madison, WI. | ||
| Phenylephrin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. | ||
| Andere Chemikalien | Alle verwendeten Chemikalien wurden von den reinsten Sorten im Handel erhältlich. |
Referenzen
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260, 617-619 (1976).
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents Actions.
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Nachdrucke und Genehmigungen
