Contrazione Arteria mesenterica e Studi Relax Utilizzando Myography automatica Wire

Summary

Un metodo myography automatizzato per misure di forza in arterie mesenteriche isolato è descritto. Si avvale di un Mulvany-Halpern miografo filo doppio Auto 510A per determinare le risposte a fenilefrina e calcio extracellulare. Il metodo permette la determinazione costante di risposte isometrica per agonisti in piccoli vasi di diametro di 60-300 micron, in modo indipendente.

Abstract

Vasi di resistenza prossimale, come le arterie mesenteriche, contribuiscono in modo sostanziale alla resistenza periferica. Questi piccoli vasi compreso tra 100-400 micron di diametro principalmente in funzione dirigere il flusso del sangue ai vari organi a seconda delle esigenze generali del corpo. L'arteria mesenterica ratto ha un diametro maggiore di 100 micron. La tecnica myography, inizialmente descritto da Mulvay e Halpern ^1, si è basata sul metodo proposto da Bevan e Osher ^2. La tecnica fornisce informazioni su piccole imbarcazioni in condizioni isometriche, dove è impedito riduzione sostanziale della preparazione muscolare. Dal momento che la produzione di forza e la sensibilità dei vasi di diversi agonisti dipende il grado di allungare, in base alle attivo tensione-lunghezza relazione, è essenziale per condurre studi in condizioni di contrazione isometrica per evitare che la conformità dei fili di montaggio. Fili di acciaio inossidabile sono preferibili ai fili di tungsteno a causa dell'ossidazione di quest'ultima, che colpisce le risposte registrate ^3. La tecnica consente il raffronto di agonista-indotto le contrazioni dei vasi montati per ottenere elementi per la normale funzione dei recettori della muscolatura liscia vascolare delle cellule.

Abbiamo dimostrato in diversi studi che isolate le arterie mesenteriche che sono contratte con phenylyephrine rilassarsi dopo l'aggiunta delle concentrazioni cumulative di calcio extracellulare (Ca ^{2 +} _e). I risultati ci hanno portato a concludere che i nervi sensoriali perivascolare, che esprimono il G protein-coupled Ca ^{2 +} recettore sensibile (CaR), mediare questa risposta vasodilatazione. Utilizzando un metodo automatizzato myography filo, mostriamo qui che le arterie mesenteriche da Wistar, Dahl sensibili al sale (DS) e Dahl resistenti al sale (DR) ratti rispondono in modo diverso a Ca ^{2 +} _e. I tessuti di ratti Wistar hanno mostrato maggiore Ca ^{2 +-sensibilità} rispetto a quelli di DR e DS. Espressione CaR ridotto nelle arterie mesenteriche da ratti DS correla con ridotta Ca ^{2 +} _e-indotta di rilassamento isolato, pre-contratto arterie. I dati suggeriscono che l'auto è richiesto per il rilassamento delle arterie mesenteriche sotto tono adrenergico aumentato, come avviene nella ipertensione, e indicano un difetto nella via di segnalazione CaR negli animali Dahl, che è molto più grave nei DS.

Il metodo è utile per determinare la reattività vascolare ex vivo nelle arterie di resistenza mesenteriche e simili piccoli vasi sanguigni e confronti tra agonisti e / o antagonisti possono essere facilmente e costantemente valutati fianco a fianco ^6,7,8.

Protocol

1. Isolamento di arteria mesenterica piccolo ratto Anestetizzare animali con isoflurano in una camera chiusa e pulire l'addome con l'alcol. Eseguire una linea mediana laparotomia per esporre letto mesenterica. Utilizzando le forbici, rimuovere circa 85 cm di intestino con l'alimentazione vasi con l'arteria mesenterica superiore. Tagliare l'estremità prossimale della sezione intestinale vicino al piloro e la fine distale vicino alla giunzione ileo-coecal. Segmenti dell&…

Discussion

L'ipertensione è una delle principali cause di morbilità cardiovascolare, cerebrale e renale / mortalità. L'incidenza di ipertensione è alta nella popolazione e sensibili al sale ipertensione è particolarmente elevato nella popolazione, e più frequente nei neri rispetto ai bianchi. Questo si ritiene sia dovuta alla tendenza dei neri a trattenere sodio nei reni ^9. Sale-sensibilità è un fattore importante che contribuisce alla malattia renale ed è associata a disfunzione endoteliale, ma il mecc…

Materials

Name of equipment/ reagent	Company	Catalogue number	Comments(optional)
Auto Dual Wire Myograph System-510A DMT-USA, Inc.	Atlanta, GA.	100151
PowerLab/4SP Data Acquisition System	ADInstruments, Colorado Springs, CO.	ML750	New models with 4-16 input channels are available.
Dell Dimension XPS Gen 4 Computer	Dell
Stemi SV II (Apo) Dissection Microscope with Ocular	Carl Zeiss International.
Wistar, Dahl salt-sensitive, Dahl salt-resistant rats	Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN.
Rodent chow	Harland Tekland, Madison, WI.
Phenylephrine	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO.
Other chemicals			All chemicals used were of the purest grades available commercially.