بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

Summary

مفتاح التقنيات المستخدمة في تقييم<em> المبيضات</emموصوفة> المهبل في نموذج حيواني التجريبية. وسوف تسمح الأساليب جمع العينات السريع لمفاوي من المهبل وتجفيف الغدد الليمفاوية أسفل الظهر. هذه التقنيات يمكن أن تؤدي إلى نماذج الماوس من الأمراض الأخرى في المسالك التناسلية للإناث أقل.

Abstract

الفرجية المهبلية المبيضات (VVC) ، التي تسببها الأنواع المبيضات ، هو عدوى فطرية لانخفاض المسالك التناسلية للإناث الذي يؤثر على ما يقرب من 75 ٪ من النساء الأصحاء خلال سنوات الإنجاب ^18،32-34. وتشمل العوامل المؤهبة استخدام المضادات الحيوية ، والسكري غير المنضبط واضطراب في مستويات الهورمونات التناسلية بسبب الحمل ، وحبوب منع الحمل أو العلاج بالهرمونات البديلة ^33،34. VVC المتكررة (RVVC) ، على النحو المحدد ثلاثة أو أكثر من نوبات سنويا ، ويصيب 5 منفصلة إلى 8 ٪ من النساء مع عدم وجود عوامل مؤهبة ^33.

وقد تم إنشاء نموذج الفأر VVC التجريبية واستخدامها لدراسة والمرضية المخاطية استجابة المضيف ^{ل3،4،11،16،17،19،21،25،37} المبيضات. كما تم توظيف هذا النموذج لاختبار العلاجات المضادة للفطريات محتملة في الجسم الحي ^13،24. نموذج يتطلب أن يكون الحفاظ على الحيوانات في حالة pseudoestrus لتختارimal المبيضات الاستعمار / ^6،14،23 العدوى. في ظل هذه الظروف ، لن يكون تلقيح الحيوانات الفطرية المهبلية للكشف العبء لمدة أسابيع أو شهور. دراسات سابقة تظهر موازية عالية للغاية بين النموذج الحيواني والعدوى البشرية بالنسبة إلى الخصائص المناعية والفسيولوجية ^3،16،21. الخلافات ، ولكن ، وتشمل عدم وجود المبيضات المهبلي والنباتات الطبيعية ودرجة الحموضة المهبلية محايدة في الفئران.

هنا ، علينا أن نظهر سلسلة من الطرق الرئيسية في الفأر نموذج المهبل والتي تشمل التلقيح المهبلي ، وجمع عينات من المهبل السريع ، وتقييم عبء الفطرية المهبلية ، والتحضيرات لاستخراج الأنسجة الخلوية / العزلة. ويعقب ذلك من خلال نتائج ممثلة لمكونات السائل غسل المهبل ، وعبء الفطرية ، وتجفيف المحاصيل الكريات البيض العقدة اللمفية. مع استخدام مواد التخدير ، ويمكن جمع عينات غسيل عند نقاط زمنية متعددة على نفس الفئران لتقييم الطولي للالعدوى / الاستعمار. وعلاوة على ذلك ، فإن هذا النموذج يتطلب أية عوامل مناعة لبدء العدوى ، والسماح للدراسات مناعية في ظل ظروف محددة المضيفة. أخيرا ، عرض نموذج وأسلوب كل هنا يمكن أن يحتمل أن يؤدي إلى استخدام منهجيات لدراسة الأمراض المعدية الأخرى لانخفاض المسالك التناسلية للإناث (البكتيرية والطفيلية والفيروسية) ، ومنها دفاعات المضيف المحلي أو النظامية.

Protocol

1. التلقيح المهبلي مع المبيضات البيض قبل ثلاثة أيام من التلقيح ، في حين أن تقييد الحيوان لكشف البطن ، وضخ 100 ميكرولتر من زيت السمسم يحتوي على 0،1-0،5 ملغ من استراديول β – تحت الجلد في أسفل البطن. دفع إبرة حوالي 5 إلى 10 م?…

Discussion

وقد تم إنشاء نموذج الفأر تجريبية من المهبل والمبيضات تستخدم تاريخيا على مدى العقود القليلة الماضية لدراسة المخاطية استجابة المضيف لالمبيضات وكذلك لاختبار العلاجات المضادة للفطريات ^{3،4،11،13،16،17،19،21،24 ، 25،37.} قدم البروتوكولات تتضمن هنا أقل كفاءة وسائل…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Female CBA/J mice	Charles River Laboratories	01C38	5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A)	National Collection of Pathogenic Fungi, UK	NCPF3153
Sesame oil	Sigma-Aldrich	S3547	Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone	Becton Dickinson	211906	Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud dextrose agar	Becton Dickinson	211584
Collagenase type IV	Sigma-Aldrich	C5138	0.25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1.7 U/ml
Wire mesh screens	TWP	060X060S0065W36T	No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution	Invitrogen	24020-117
CytoPrep fixative	Fisher Scientific	12-570-10	Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Papanicolaou stain OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Harris’ Alum hematoxylin	EMD Chemicals	638A-85
Isoflurane	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber