הפרוטוקולים עבור הרכבת חיסון וגינלי אוסף דוגמאות במודל ניסיוני של עכבר קנדידה דלקת הנרתיק

Summary

מפתח טכניקות כדי לשמש להערכת<em> קנדידה</em> דלקת הנרתיק במודל חיה ניסיוני מתוארים. שיטות תאפשר איסוף מהיר של דגימות מן הנרתיק לימפוציטים ניקוז בלוטות לימפה המותני. טכניקות אלה יכולים להצמיח מודלים העכבר של מחלות אחרות בדרכי המין הנשי התחתון.

Abstract

Vulvovaginal קנדידה (VVC), נגרמת על ידי מינים קנדידה, הוא זיהום פטרייתי בדרכי המין הנשי הנמוך שמשפיע על כ -75% מהנשים בריאים במהלך שנות הפוריות שלהן, ^18,32-34. גורמים predisposing כוללים שימוש באנטיביוטיקה, סוכרת בלתי מבוקרת והן הפרעה ברמות הורמון הרבייה עקב הריון, גלולות למניעת הריון או טיפול הורמונלי ^33,34. VVC חוזרים (RVVC), כמוגדר שלוש או יותר אפיזודות לשנה, משפיעה על 5 נפרד 8% מהנשים ללא גורמי predisposing ^33.

דגם ניסיוני של העכבר VVC כבר נקבעה בעבר במחקר בפתוגנזה ותגובה מארח הרירית כדי קנדידה ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37.} מודל זה גם היה מועסק כדי לבחון טיפולים נגד פטריות פוטנציאל in vivo ^13,24. המודל דורש כי בעלי חיים להישמר במצב של pseudoestrus עבור optimal קנדידה קולוניזציה / זיהום ^6,14,23. בתנאים אלה, בעלי חיים מחוסן יהיה להבחין נטל פטרייתי וגינלי במשך שבועות עד חודשים. מחקרים שנעשו בעבר מראים במקביל גבוהה מאוד בין המודל בבעלי חיים הידבקות בני אדם יחסית המאפיינים החיסונית הפיזיולוגית ^3,16,21. הבדלים, לעומת זאת, כוללים חוסר קנדידה כמו הפלורה בנרתיק רגיל ו-pH נייטרלי הנרתיק בעכברים.

הנה, אנחנו מדגימים סדרה של שיטות המפתח במודל דלקת הנרתיק עכבר הכוללים חיסון הנרתיק, איסוף מהיר של דגימות מהנרתיק, הערכת נטל פטרייתי וגינלי, וההכנות רקמות להפקת בידוד הסלולר /. זה ואחריו נציג תוצאות עבור המרכיבים של נוזל שטיפה וגינלית, נטל פטרייתי, וניקוז הלימפה התשואות לויקוציטים. עם שימוש בהרדמה, דגימות שטיפה ניתן לאסוף בנקודות זמן רבות על עכברים זהה להערכת האורך שלזיהום / קולוניזציה. יתר על כן, מודל זה לא דורש סוכנים ליזום מערכת החיסון לזיהום, ומאפשר מחקרים החיסונית בתנאים המארח מוגדר. לבסוף, מודל וכל טכניקה הציג כאן עלול להצמיח שימוש במתודולוגיות לבחון ומחלות זיהומיות אחרות של דרכי להוריד את המין הנשי (חיידקים, טפילים, ויראלי) ו בהתאמה הגנות המארח המקומי או מערכתי.

Protocol

1. חיסון הנרתיק עם קנדידה אלביקנס שלושה ימים לפני חיסון, ולמנוע את השימוש בבעלי חיים על מנת לחשוף את הבטן, להזריק 100 μl של שמן שומשום המכילה 0.1-0.5 מ"ג של β-estradiol תת עורי באזור הבטן התחתונה. מראש את המחט כ -5 עד 10 מ"מ ?…

Discussion

דגם ניסיוני של העכבר קנדידה דלקת הנרתיק הוקם ושימש היסטורית על בעשורים האחרונים כדי ללמוד בתגובה מארח הרירית כדי קנדידה, כמו גם בדיקות וטיפולים נגד פטריות ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} הפרוטוקולים המוצגים כאן לשלב יעיל בשיטות פחות עתירי עבודה, ואשר נראה כי אחת מ…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Female CBA/J mice	Charles River Laboratories	01C38	5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A)	National Collection of Pathogenic Fungi, UK	NCPF3153
Sesame oil	Sigma-Aldrich	S3547	Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone	Becton Dickinson	211906	Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud dextrose agar	Becton Dickinson	211584
Collagenase type IV	Sigma-Aldrich	C5138	0.25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1.7 U/ml
Wire mesh screens	TWP	060X060S0065W36T	No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution	Invitrogen	24020-117
CytoPrep fixative	Fisher Scientific	12-570-10	Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Papanicolaou stain OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Harris’ Alum hematoxylin	EMD Chemicals	638A-85
Isoflurane	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber