Protocollen voor Vaginale Inenting en Sample Collection in het experimenteel muismodel van Candida Vaginitis

Summary

Belangrijke technieken om te worden gebruikt bij de evaluatie van<em> Candida</em> Vaginitis in een experimenteel diermodel beschreven. De methoden zal een snelle inzameling van vaginale specimens en lymfocyten uit drainerende lumbale lymfeklieren. Deze technieken zou kunnen leiden tot muismodellen van andere ziekten in de vrouwelijke lagere genitale tractus.

Abstract

Vulvovaginale candidiasis (VVC), veroorzaakt door Candida-soorten, is een schimmelinfectie van de lagere vrouwelijke geslachtsorganen dat ongeveer 75% van anders gezonde vrouwen treft tijdens hun reproductieve jaren ^18,32-34. Predisponerende factoren zijn onder meer het gebruik van antibiotica, ongecontroleerde diabetes en verstoring van de voortplanting hormoonspiegels ten gevolge van zwangerschap, orale anticonceptiva of hormoonvervangende therapieën ^33,34. Recurrente VVC (RVVC), gedefinieerd als drie of meer episodes per jaar, van invloed op een aparte 5 tot 8% van de vrouwen met geen predisponerende factoren ^33.

Een experimenteel muismodel van VVC is vastgesteld en gebruikt om de pathogenese en mucosale gastheer reactie op Candida ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37} studeren. Dit model is ook gebruikt om potentiële anti-schimmel therapieën te testen in vivo ^13,24. Het model vereist dat de dieren worden gehouden in een staat van pseudoestrus voor optiMAL Candida kolonisatie / infectie ^6,14,23. Onder dergelijke omstandigheden zal geënte dieren hebben aantoonbaar vaginale schimmel last voor weken tot maanden. Verleden studies tonen een extreem hoge parallel tussen het diermodel en menselijke besmetting met betrekking tot immunologische en fysiologische eigenschappen van ^3,16,21. Verschillen zijn echter ook een gebrek aan Candida als normale vaginale flora en een neutrale vaginale pH in de muizen.

Hier tonen we een reeks belangrijke methoden in de muis vaginitis model dat vaginale inenting, een snelle inzameling van vaginale exemplaren, de beoordeling van de vaginale schimmel last, en weefsel de voorbereidingen voor mobiele extractie / isolatie te nemen. Dit wordt gevolgd door representatieve resultaten voor de bestanddelen van vaginale lavage vocht, schimmel last, en de drainerende lymfeklier leukocyten oplevert. Met het gebruik van verdoving, kan lavage monsters worden verzameld op verschillende tijdstippen op dezelfde muizen voor longitudinale evaluatie van deinfectie / kolonisatie. Bovendien is dit model vereist geen immunosuppressieve middelen te initiëren infectie, waardoor immunologische studies onder gedefinieerde omstandigheden gastheer. Ten slotte is het model en elke techniek introduceerde hier zou kunnen leiden tot het gebruik van de methoden om andere besmettelijke ziekten van de lagere vrouwelijke geslachtsorganen (bacteriële, parasitaire, virale) en de respectieve lokale of systemische afweer van de gastheer te onderzoeken te geven.

Protocol

1. Vaginale inoculatie met Candida albicans Drie dagen vóór de inoculatie, terwijl straatverbod het dier naar de buik bloot, injecteren van 100 ul van sesamolie met 0.1-0.5 mg van de β-estradiol subcutaan in de onderbuik. Vooraf de naald ongeveer 5 tot 10 mm lateraal van de huid om lekkage van de injectieplaats te minimaliseren. De subcutane toediening van oestrogeen in de onderbuik is optimaal in dit model als gevolg van de nabijheid van de genitale tractus. Effectieve doses kan per muizen…

Discussion

Een experimenteel muismodel van Candida vaginitis is vastgesteld en historisch gebruikt voor de afgelopen decennia mucosale gastheer reactie op Candida studie en voor het testen van antischimmel therapieën ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} De protocollen die hier nemen efficiënte en minder arbeidsintensieve methoden, en lijken een van de meest optimale model systemen van Candida vaginitis beschreven. Deze technieken maken een snelle kwantificering van de schimmel last en het verzam…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
Female CBA/J mice	Charles River Laboratories	01C38	5-6 weeks of age
Candida albicans (3153A)	National Collection of Pathogenic Fungi, UK	NCPF3153
Sesame oil	Sigma-Aldrich	S3547	Does not need to be pre-sterilized before use
Β-estradiol 17-valerate	Sigma-Aldrich	E1631	0.1-0.5mg in sesame oil
Phytone peptone	Becton Dickinson	211906	Supplement with 0.1% glucose
Trypan blue solution	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud dextrose agar	Becton Dickinson	211584
Collagenase type IV	Sigma-Aldrich	C5138	0.25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1.7 U/ml
Wire mesh screens	TWP	060X060S0065W36T	No. 60 mesh, stainless
Hanks’ balanced salt solution	Invitrogen	24020-117
CytoPrep fixative	Fisher Scientific	12-570-10	Preserves smear slides
Papanicolaou stain EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Papanicolaou stain OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Harris’ Alum hematoxylin	EMD Chemicals	638A-85
Isoflurane	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber