Parabiose in Muizen: Een gedetailleerd protocol

Summary

Parabiotic samenvoegen van twee organismen leidt tot de ontwikkeling van een gedeelde bloedsomloop. In dit protocol beschrijven we de chirurgische stappen om parabiotic verbinding tussen een wildtype muis en een constitutieve GFP-expressie muis vormen.

Abstract

Parabiose is een chirurgische vereniging van twee organismen waardoor delen van de bloedsomloop. Bevestiging van de huid van twee dieren bevordert vorming van microvasculatuur op de plaats van ontsteking. Parabiotic partners delen hun circulerende antigenen en dus vrij zijn van ongewenste immuunreactie. Voor het eerst beschreven door Paul Bert in 1864 ^1, werd de parabiose operatie verfijnd door Bunster en Meyer in 1933 naar dieroverleving ² te verbeteren. In het huidige protocol, worden twee muizen operatief verbonden na een wijziging van de Bunster en Meyer techniek. Dieren worden aangesloten via de elleboog-en kniegewrichten, gevolgd door bevestiging van de huid waardoor stevige steun die stam voorkomt op de huid gehecht. Hierin beschrijven we in detail de parabiotic verbinden van een alomtegenwoordige GFP-expressie muis om een ​​wild-type (WT) muizen. Twee weken na de ingreep, wordt het paar gescheiden en GFP positieve cellen kan worden gedetecteerd door flow cytometrische analyse in het bloion van de WT muizen. Het bloed chimerisme maakt het mogelijk om de bijdrage van de circulerende cellen van een dier van de andere onderzoeken.

Introduction

Parabiose, de chirurgische samenvoegen van twee organismen, werd eerst beschreven in 1864 door Paul Bert als een manier om een model van gedeelde bloedsomloop kunnen bestuderen en bestond uit het verbinden van de huid en spieren wanden van twee ratten ^1. Parabiose bevordert vorming van capillairen in de plaats van ontsteking ³ en verscheidene toepassingen in fysiologische studies, zoals hormonale communicatie tussen de hypofyse en de geslachtsklieren en de rol van de nier hypertensie ⁴ hadden. Het is verder gebruikt om de rekrutering en integratie van progenitorcellen onderzoeken neovascularisatie ^5, migratie van hematopoietische stamcellen ⁶ en lymfocyttransport ^7, alsmede de rol en kinetiek van circulerende inflammatoire of stamcellen in tumormetastase ^8,9, en neurodegeneratieve ziekten ^10.

Een belangrijk voordeel van parabiose leugensin dat het een partnerschap dieren hebben gemeenschappelijke circulerende antigenen, waardoor cel migratie en neovascularisatie, zonder dat er een immunologische reactie. Belangrijk Weissman e.a.. Gebleken dat parabiose tussen mannelijke en vrouwelijke muizen leidt niet tot vorming van antilichamen anti HY ^11.

In het oorspronkelijke protocol beschreven door Paul Bert werden de twee dieren elkaar verbonden door verbinding van de huid en spieren wanden ^1. Deze werkwijze echter tot aanzienlijke belasting voor de dieren en resulteerde in hoge mortaliteit als gevolg van infectie van de wond. Sindsdien is de parabiose techniek is herzien door verschillende groepen met de meest overheersende zijnde de door Bunster en Meyer voorgesteld in 1933 ² protocol. Hun methode onder verbinding van de scapula gewrichten, lichaamsholten, en de huid, waardoor betere ondersteuning en minder pijn voor de dieren. Tegelijkertijd resultaat van de nieuwe werkwijze minimale postoperatieve zorg en significant verlaagde sterftecijfers. De hierin beschreven protocol is een modificatie van de Bunster en Meyer techniek die minder invasief en kan steviger verbinden. Namelijk worden muizen verbonden door de elleboog en kniegewrichten en de huid. De bundeling voorkomt verlenging van de huid en veroorzaakt dus minder pijn en complicaties. Hier beschrijven we de toetreding van een wild-type (WT) volwassen muis om een ​​constitutief GFP-expressie muis. We zien dat twee weken na chirurgie bereiken we 50% bloed chimerisme aantonen van de effectiviteit van deze chirurgische procedure om een ​​gedeelde bloedsomloop systeem.

Protocol

Alle dierlijke studies werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van UCLA Animal Care en gebruik Comite en de National Institutes of Health Guide voor de zorg en het gebruik van proefdieren. De duur van de hieronder beschreven procedure is ongeveer 45-60 minuten van begin tot eind. 1. Bereiding van chirurgische Field Voer de procedure in een schone dier operatie kamer. Uitrusting: isofluraan Vaporizer, Gaymer T Pomp met verwarming pad. Steriele instrumenten: twe…

Representative Results

De verwachte uitkomst van parabiose twee organismen gelijke bijdrage van bloedsomloop elk dier een gemeenschappelijke bloedsomloop (fig. 2). Men kan gemakkelijk controleren of de succesvolle verevening van het bloed van de parabiosed WT en GFP positieve muizen door flowcytometrische analyse. Hier, veneus bloed werd verkregen van de staarten van beide parabionts 2 weken na de operatie en werd gefractioneerd op perifere bloedcellen (erytrocyten te sluiten). De gefractioneerde-hematopoietische cellen afgel…

Discussion

De parabiose methode die hier besproken presenteert minimale technische problemen en resulteert in lage sterftecijfers. De bevestiging van de knie en elleboog gewrichten is een aanzienlijke verbetering van de Bunster en Meyer techniek. De procedure blijft invasieve aldus handhaven van steriele omstandigheden tijdens de operatie is noodzakelijk. Voor infectie van de operatiewond verder te voorkomen, is het belangrijk dat de parabiosed dieren een combinatie van antibiotica en regelmatig worden gecontroleerd. Voor goede st…

Materials

Name of equipment	Company	Catalog number
Isoflurane-Phoenix	Clipper	NDC 57319-559-06
Posi-Seal Induction Chamber	Molecular Imaging Products	AS-01-0530-SM
Portable Anesthesia System	Molecular Imaging Products	AS-01-0007
Gaymer T Pump	Gaymar Industries, Inc	TP650
Warming Blanket (Heating pad)	Kent Scientific Corp	TP-22G
Curved forceps	Roboz	RS-5101
Scissors	Fine Science Tools (FST)	FST 14063-09
Needle holder	FST	FST 12501-13
Electrical shaver	Oster	Golden A5