Parabiose Verbinden von zwei Organismen führt zu der Entwicklung einer gemeinsamen Kreislauf. In diesem Protokoll beschreiben wir die OP-Schritte, um eine Verbindung zwischen einem Parabiose Wildtyp-Maus und einem konstitutiven GFP-exprimierenden Maus bilden.
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Methodenartikel
Parabiose in Mäuse: Ein detailliertes Protokoll
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Parabiose ist eine chirurgische Verbindung von zwei Organismen ermöglicht die gemeinsame Nutzung von den Blutkreislauf. Anbringen der Haut von zwei Tieren fördert die Bildung von Mikrogefäß am Ort der Entzündung. Parabiose Partner teilen ihre zirkulierende Antigene und sind somit frei von unerwünschten Immunreaktion. Zuerst von Paul Bert 1864 1 beschrieben, wurde die Operation durch Parabiose Bunster und Meyer im Jahr 1933 weiterentwickelt, um das Überleben der Tiere 2 zu verbessern. Im aktuellen Protokoll werden zwei Mäuse chirurgisch nach einer Modifikation der Bunster und Meyer Technik verbunden. Die Tiere werden durch die Ellbogen-und Kniegelenke, gefolgt von Befestigung der Haut ermöglicht feste Unterstützung, die Belastung der Haut vernäht verhindert verbunden. Hier beschreiben wir im Detail die Parabiose Verbindung von einer allgegenwärtigen GFP-exprimierenden Maus zu einer Wildtyp (WT)-Maus. Zwei Wochen nach dem Eingriff wird das Paar getrennt und im Blut zirkulierenden GFP-positive Zellen durch durchflusszytometrische Analyse nachgewiesen werdenIon der WT-Maus. Das Blut Chimärismus ermöglicht es, den Beitrag der zirkulierenden Zellen von einem Tier in dem anderen zu prüfen.
Einleitung
Parabiose, die chirurgische Verbindung von zwei Organismen, wurde erstmals 1864 von Paul Bert als eine Möglichkeit, ein Modell zur gemeinsamen Kreislaufsystem entwickeln zu studieren beschrieben und bestand aus der Verbindung von der Haut und Muskelwände von zwei Ratten ein. Parabiose fördert die Bildung von Mikrogefäße an der Stelle der Entzündung und 3 hat mehrere Anwendungen in physiologischen Untersuchungen, wie die Hormonverbindung zwischen der Hypophyse und Gonaden sowie die Rolle der Niere bei Hypertonie 4 hatte. Es wurde weiter eingesetzt worden, um die Rekrutierung und Integration von Vorläuferzellen in Neovaskularisation
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Protokoll
Alle Tierversuche wurden nach den Richtlinien der UCLA Tierpflege und Verwendung Ausschuss und den National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt. Die Dauer des nachstehend beschriebenen Verfahrens beträgt etwa 45-60 min von Anfang bis Ende.
1. Vorbereitung der OP-Feld
- Führen Sie das Verfahren in einem Reinraum Tierchirurgie.
- Ausstattung: Isofluran Vaporizer, Gaymer T Pumpe mit Heizkissen.
- Sterile Instrumente: zwei gebogenen Pinzette, feine Scheren, Nadelhalter.
- Sterile Handschuhe müssen während des gesamten Verfahrens verwendet werden.
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Ergebnisse
Die voraussichtliche Ergebnis der Parabiose von zwei Organismen ist die gleiche Beitrag der Kreislauf-System eines jeden Tieres auf einen gemeinsamen Blutkreislauf (Abbildung 2). Man kann leicht überprüfen, die erfolgreiche Gleichgewichtseinstellung des Blut des parabiosed WT und GFP-positiven Mäusen durch durchflusszytometrische Analyse. Hier wurde venöses Blut aus den Schwänzen der beiden parabionts bei 2 Wochen nach der Operation erhalten und wurde für periphere Blutzellen fraktioniert (Erythrozyten .......
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Diskussion
Die hier diskutierten Parabiose Verfahren stellt minimale technische Schwierigkeiten und führt zu einer geringen Sterblichkeit. Die Befestigung der Knie-und Ellbogengelenke ist eine signifikante Verbesserung des Bunster und Meyer Technik. Allerdings bleibt die invasive Verfahren somit wartungs von sterilen Bedingungen in der gesamten Operation ist zwingend erforderlich. Um weiter zu verhindern, Infektion der Operationsstelle ist es wichtig, dass die parabiosed Tiere erhalten eine Kombination von Antibiotika und regelmäß.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine finanziellen Interessen konkurrieren.
Danksagungen
Die Autoren bedanken sich bei Adriane Mosley und Libuse Jerabek (Stanford) für die Unterstützung bei der chirurgischen Technik zu danken.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Isofluran-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 | |
| Posi-Seal Induktionskammer | Molekulare Bildgebungsprodukte | AS-01-0530-SM | |
| Tragbares Anästhesiesystem | Molekulare Bildgebungsprodukte | AS-01-0007 | |
| Gaymer T Pumpe | Gaymar Industries, Inc | TP650 | |
| Wärmedecke (Heizkissen) | Kent Scientific Corp | TP-22G | |
| Gebogene Pinzette | Roboz | RS-5101 | |
| Schere | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 | |
| Nadelhalter | FST | FST 12501-13 | |
| Elektrorasierer | Oster | Golden A5 |
Referenzen
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C.
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Nachdrucke und Genehmigungen
