Parabiose in Mäuse: Ein detailliertes Protokoll
Summary
Parabiose Verbinden von zwei Organismen führt zu der Entwicklung einer gemeinsamen Kreislauf. In diesem Protokoll beschreiben wir die OP-Schritte, um eine Verbindung zwischen einem Parabiose Wildtyp-Maus und einem konstitutiven GFP-exprimierenden Maus bilden.
Abstract
Parabiose ist eine chirurgische Verbindung von zwei Organismen ermöglicht die gemeinsame Nutzung von den Blutkreislauf. Anbringen der Haut von zwei Tieren fördert die Bildung von Mikrogefäß am Ort der Entzündung. Parabiose Partner teilen ihre zirkulierende Antigene und sind somit frei von unerwünschten Immunreaktion. Zuerst von Paul Bert 1864 1 beschrieben, wurde die Operation durch Parabiose Bunster und Meyer im Jahr 1933 weiterentwickelt, um das Überleben der Tiere 2 zu verbessern. Im aktuellen Protokoll werden zwei Mäuse chirurgisch nach einer Modifikation der Bunster und Meyer Technik verbunden. Die Tiere werden durch die Ellbogen-und Kniegelenke, gefolgt von Befestigung der Haut ermöglicht feste Unterstützung, die Belastung der Haut vernäht verhindert verbunden. Hier beschreiben wir im Detail die Parabiose Verbindung von einer allgegenwärtigen GFP-exprimierenden Maus zu einer Wildtyp (WT)-Maus. Zwei Wochen nach dem Eingriff wird das Paar getrennt und im Blut zirkulierenden GFP-positive Zellen durch durchflusszytometrische Analyse nachgewiesen werdenIon der WT-Maus. Das Blut Chimärismus ermöglicht es, den Beitrag der zirkulierenden Zellen von einem Tier in dem anderen zu prüfen.
Introduction
Parabiose, die chirurgische Verbindung von zwei Organismen, wurde erstmals 1864 von Paul Bert als eine Möglichkeit, ein Modell zur gemeinsamen Kreislaufsystem entwickeln zu studieren beschrieben und bestand aus der Verbindung von der Haut und Muskelwände von zwei Ratten ein. Parabiose fördert die Bildung von Mikrogefäße an der Stelle der Entzündung und 3 hat mehrere Anwendungen in physiologischen Untersuchungen, wie die Hormonverbindung zwischen der Hypophyse und Gonaden sowie die Rolle der Niere bei Hypertonie 4 hatte. Es wurde weiter eingesetzt worden, um die Rekrutierung und Integration von Vorläuferzellen in Neovaskularisation 5, Migration von hämatopoetischen Stammzellen 6 und Lymphozyten-7, sowie die Rolle und die Kinetik der zirkulierenden Entzündungs oder Stammzellen bei der Tumormetastasierung 8,9 zu untersuchen, und neurodegenerativen Erkrankung 10.
Ein wesentlicher Vorteil liegt Parabiose, dass die Tiere eine Partnerschaft gemeinsame zirkulierenden Antigene, so dass die Zellmigration und Gefäßneubildung ohne Auslösung einer immunologischen Reaktion. Wichtig ist, Weissman et al. Haben, dass Parabiose zwischen männlichen und weiblichen Mäusen gezeigt, nicht zur Bildung von Anti-Antikörpern führen HY 11.
In dem von Paul Bert beschrieben Original-Protokoll wurden die beiden Tiere zusammen durch Anschluss der Haut-und Muskelwände 1 verbunden. Dieses Verfahren jedoch eine erhebliche Belastung für die Tiere und führte zu hoher Mortalität aufgrund einer Infektion der Wunde. Seitdem ist die Parabiose Technik wurde von mehreren Gruppen mit den meisten vorherrschende wobei der durch Bunster und Meyer 1933 2 vorgeschlagene Protokoll überarbeitet. Ihre Methode enthalten Verbinden der Schulterblatt Gelenken, Körperhöhlen, und die Haut und ermöglicht eine bessere Unterstützung und weniger Schmerzen für die Tiere. Zur gleichen Zeit führte die neue Methode in minimal post-operative Betreuung und der wesentlichenlich verringerte Sterblichkeit. Das hierin beschriebene Protokoll ist eine Abwandlung der Bunster und Meyer Technik, die weniger invasiv ist und ermöglicht festere Verbindung. Nämlich werden die Mäuse durch die Ellbogen-und Kniegelenke sowie der Haut verbunden. Diese Verbindung verhindert Verlängerung der Haut und verursacht daher weniger Schmerzen und Komplikationen. Hier beschreiben wir die Verbindung von einem Wildtyp (WT) erwachsenen Maus mit einem konstitutiven GFP-exprimierenden Maus. Wir zeigen, dass zwei Wochen nach der Operation können wir 50% der Blut Chimärismus zu erreichen, die die Wirksamkeit dieser chirurgischen Verfahren, um einen gemeinsamen Kreislauf-System zu erstellen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die hier diskutierten Parabiose Verfahren stellt minimale technische Schwierigkeiten und führt zu einer geringen Sterblichkeit. Die Befestigung der Knie-und Ellbogengelenke ist eine signifikante Verbesserung des Bunster und Meyer Technik. Allerdings bleibt die invasive Verfahren somit wartungs von sterilen Bedingungen in der gesamten Operation ist zwingend erforderlich. Um weiter zu verhindern, Infektion der Operationsstelle ist es wichtig, dass die parabiosed Tiere erhalten eine Kombination von Antibiotika und regelm?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich bei Adriane Mosley und Libuse Jerabek (Stanford) für die Unterstützung bei der chirurgischen Technik zu danken.
Materials
| Name of equipment | Company | Catalog number |
| Isoflurane-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 |
| Posi-Seal Induction Chamber | Molecular Imaging Products | AS-01-0530-SM |
| Portable Anesthesia System | Molecular Imaging Products | AS-01-0007 |
| Gaymer T Pump | Gaymar Industries, Inc | TP650 |
| Warming Blanket (Heating pad) | Kent Scientific Corp | TP-22G |
| Curved forceps | Roboz | RS-5101 |
| Scissors | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 |
| Needle holder | FST | FST 12501-13 |
| Electrical shaver | Oster | Golden A5 |
Referenzen
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l’Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
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- Finerty, J. C. Parabiosis in physiological studies. Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).
- Aicher, A., Heeschen, C. Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location. Circ. Res. 101, e102 (2007).
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