ציטולוגיה רושם של פינת מגב ומכסה
Summary
We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.
Abstract
Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.
Introduction
העפעף העליון האנושי מבצע כ -10,000 מהבהבת מדי יום 1, עם רק 1 – באזור לחמית 2 מ"מ צר מנוגדי העולם העיני. בשל התנועה המנגבת שלה במהלך למצמץ, חלק זה של שולי העפעף זכה לכינוי באזור "מגב מכסה" 2. ההנחה היא כי החיכוך הוא גדל באזור זה במהלך מהבהב הרגיל, בשל המכסה מנגב רחבי הגלובוס. זה עשוי לשחק תפקיד משמעותי בנוחות עינית. עדשות מגע חובשים באי נוחות עינית ניסיון מסוים וזאת אחת הסיבות העיקריות הפסקת עדשה ללבוש 3. כאשר עדשות מגע מושמות על העין, מקדם החיכוך בין חומר העדשה ואת משטח העין הוכח לשנות 4. יש ראיות המצביעות על כך סימפטומים יובש יכולים להיות קשורים חיכוך שונה זו 2,5,6.
קשר זה יכול לבוא לידי ביטוי גם תופעות הנצפה קלינית, wi מכסה בעיקרלכל epitheliopathy (LWE), המכונה גם מכתים שולי העפעף העליון (ULMS) 6. LWE הוא סימן מוקדם של גירוי של העין מנבא פוטנציאל המחלה עין יבשה. הוא ציין ומדד ידי מכתים החיוניים של אזורים שולי העפעף העליון והתחתון. בעוד לדירוג זה מערכה 2 והתוקף הקליני שלה (כלומר, מתאם עם סימפטומים סובייקטיבי) עדיין ניטש ויכוח, אי נוחות עינית נותרת חידה עבור קלינאים ומדענים כאחד, והכי חשוב, מטרד עבור חולים.
עד כה, מעט מאוד ידוע על וריאציות קליניות-רלוונטיות (תת) האנטומיה הסלולר והפיסיולוגיה של אזור מגב המכסה 7 ורק אחד דיווחים עושים שימוש בשיטות ציטולוגיה 8. ציטולוגית Impression (IC) הועסקה במשך 40 שנים כדי לאסוף תאים מפני השטח האפיתל של bulbar או לחמית tarsal ידי יישום של קרום 9,10. לאחר ההסרה, התאים החסידים לעבור גמכתים ytological והדמיה מיקרוסקופית. בשל ההבדלים אנטומיים הסלולר באזור המגב המכסה, טכניקה זו דורשת אופטימיזציה.
Protocol
Representative Results
Discussion
ציטולוגיה רושמת בדרך כלל מבוצעת על הלחמית bulbar, באמצעות ממברנות אסתר תאיות מעורב. דוגמאות נחתכים לגודל מסדינים חומר בתפזורת, מעוקר, שיושמה להסיר מפני השטח של הלחמית באמצעות מלקחיים. כל שימוש אחר בחומר קרום אותו, מכשיר IC-נשלט בוכנה נועד לאחרונה כדי להתאים את הגיאומטריה…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to acknowledge our colleague Dr. Jalaiah Varikooty who provided insight and expertise on the topic of the lid wiper, that greatly assisted this research.
Materials
| Alcian Blue, 1% in 3% Acetic Acid | Sigma | B8438-250ML | |
| Hematoxylin, Gill 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
| Papanicolaou stain, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
| Papanicolaou stain, Modified EA | Sigma | HT40232-1L | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Life Technologies | L-3224 | contains ethidium homodimer-1 and Calcein AM dyes |
| Alcaine (0.5% proparacaine hydrochloride) | Alcon | ||
| Millicell Cell Culture Insert, 12 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µm | EMD Millipore | PICM01250 | |
| 35 mm Glass Bottom Dishes | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |
Referenzen
- Barbato, G., et al. Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate. Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).
- Korb, D. R., et al. Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers. Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).
- Dumbleton, K., Woods, C. A., Jones, L. W., Fonn, D. The impact of contemporary contact lenses on contact lens discontinuation. Eye & Contact Lens. 39, 93-99 (2013).
- Roba, M., Duncan, E., Hill, G., Spencer, N., Tosatti, S. Friction measurements on contact lenses in their operating environment. Tribol Lett. 44, 387-397 (2011).
- Sickenberger, W., Pult, H., Sickenberger, B. LIPCOF and contact lens wearers: a new tool to forecast subjective dryness and degree of comfort of contact lens wearers. Contactologia. 22, 74-79 (2000).
- Pult, H., Purslow, C., Berry, M., Murphy, P. J. Clinical tests for successful contact lens wear: relationship and predictive potential. Optom Vis Sci. 85, E924-E929 (2008).
- Doughty, M. J. Morphological features of cells along Marx’s line of the marginal conjunctiva of the human eyelid. Clin Exp Optom. 96, 76-84 (2013).
- Jalbert, I., et al. Assessing the human lid margin epithelium using impression cytology. Acta Ophthalm. 90, e547-e552 (2012).
- Nelson, J. D. Impression cytology. Cornea. 7, 71-81 (1988).
- Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. A simple conjunctival biopsy. Am J Ophthalmol. 84, 798-801 (1977).
- Wilson, T. . Confocal microscopy. , 1-64 (1990).
- Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73-76 (1990).
- Tomlins, P., Roy, P., Curnow, J., Rauz, S. Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival Impression for Flow Cytometry. Invest Ophthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).
- Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Res Proj Dry Eye Syn. 45, 108-122 (2010).
- Knop, E., et al. The lid wiper and muco-cutaneous junction anatomy of the human eyelid margins: an in vivo confocal and histological study. J Anat. 218, 449-461 (2011).
- Christensen, J. A., Skaarland, E. Nuclear and cell area measurements in the cytological evaluation of pleural effusions: a study of subjective assessments and morphometric measurements. Diag Cytopathol. 3, 50-54 (1987).
