蓋ワイパーエリアの印象細胞診
Summary
We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.
Abstract
Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.
Introduction
眼球と対向する2ミリメートル狭い結膜地域-人間の上まぶたはわずか1で、毎日1約1万点滅を実行します。まばたきの間のワイピング動作による、眼瞼縁のこの部分は、「蓋ワイパー「領域2と呼ばれています。摩擦が原因で地球上ワイピング蓋に、常習的な点滅の間にこの領域で増加することが想定されます。これは、眼の快適で重要な役割を果たしている可能性があります。特定の経験眼の不快感のコンタクトレンズ装用者、これは3を着用レンズを停止するための主要な理由の一つです。コンタクトレンズが眼に配置されると、レンズ材料と眼の表面との間の摩擦係数を4に変更することが示されています。乾燥状態の症状は、この変更された摩擦2,5,6-に関連することができることを示唆する証拠があります。
この関連付けはまた、臨床的に観察現象に反映される可能性があり、特に蓋のwi上皮症（LWE）あたり、また上蓋マージン染色（ULMS）6と呼ばれます。 LWEは、眼の刺激の初期兆候とドライアイ疾患のための潜在的な予測因子です。これは、観察された上下の眼瞼縁の領域の生体染色によって測定されます。このグレーディングシステム2とその臨床的妥当性（自覚症状を持つ、すなわち、相関が）議論の下にまだあるが、眼の不快感は、最も重要なのは、患者にとって不便似臨床医と科学者のための難問のままと。
現在まで、少しは蓋ワイパー領域7の（サブ）携帯解剖学と生理学において臨床的に関連のバリエーションについては知られており、1つのレポートだけでは細胞学的方法8を利用します。印象細胞診（IC）は、膜9,10の適用によって眼球や瞼板結膜の上皮表面から細胞を収集するために40年以上にわたって使用されています。除去の際、接着細胞は、cを受けますytological染色および顕微鏡イメージング。蓋ワイパー領域における解剖学的および細胞性の違いのために、この技術は、最適化を必要とします。
Protocol
Representative Results
Discussion
印象の細胞学は、典型的には、混合セルロースエステル膜を用いて、眼球結膜上で実行されます。サンプルは、バルク材料のシートのサイズに切断し、滅菌、適用及び鉗子を使用して、結膜の表面から除去されます。同一の膜材料を用い、ピストン制御ICデバイスは、最近眼球結膜の表面形状に適合するように設計されており、アプリケーション13との間の一貫した圧…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to acknowledge our colleague Dr. Jalaiah Varikooty who provided insight and expertise on the topic of the lid wiper, that greatly assisted this research.
Materials
| Alcian Blue, 1% in 3% Acetic Acid | Sigma | B8438-250ML | |
| Hematoxylin, Gill 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
| Papanicolaou stain, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
| Papanicolaou stain, Modified EA | Sigma | HT40232-1L | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Life Technologies | L-3224 | contains ethidium homodimer-1 and Calcein AM dyes |
| Alcaine (0.5% proparacaine hydrochloride) | Alcon | ||
| Millicell Cell Culture Insert, 12 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µm | EMD Millipore | PICM01250 | |
| 35 mm Glass Bottom Dishes | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |
Referenzen
- Barbato, G., et al. Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate. Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).
- Korb, D. R., et al. Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers. Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).
- Dumbleton, K., Woods, C. A., Jones, L. W., Fonn, D. The impact of contemporary contact lenses on contact lens discontinuation. Eye & Contact Lens. 39, 93-99 (2013).
- Roba, M., Duncan, E., Hill, G., Spencer, N., Tosatti, S. Friction measurements on contact lenses in their operating environment. Tribol Lett. 44, 387-397 (2011).
- Sickenberger, W., Pult, H., Sickenberger, B. LIPCOF and contact lens wearers: a new tool to forecast subjective dryness and degree of comfort of contact lens wearers. Contactologia. 22, 74-79 (2000).
- Pult, H., Purslow, C., Berry, M., Murphy, P. J. Clinical tests for successful contact lens wear: relationship and predictive potential. Optom Vis Sci. 85, E924-E929 (2008).
- Doughty, M. J. Morphological features of cells along Marx’s line of the marginal conjunctiva of the human eyelid. Clin Exp Optom. 96, 76-84 (2013).
- Jalbert, I., et al. Assessing the human lid margin epithelium using impression cytology. Acta Ophthalm. 90, e547-e552 (2012).
- Nelson, J. D. Impression cytology. Cornea. 7, 71-81 (1988).
- Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. A simple conjunctival biopsy. Am J Ophthalmol. 84, 798-801 (1977).
- Wilson, T. . Confocal microscopy. , 1-64 (1990).
- Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73-76 (1990).
- Tomlins, P., Roy, P., Curnow, J., Rauz, S. Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival Impression for Flow Cytometry. Invest Ophthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).
- Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Res Proj Dry Eye Syn. 45, 108-122 (2010).
- Knop, E., et al. The lid wiper and muco-cutaneous junction anatomy of the human eyelid margins: an in vivo confocal and histological study. J Anat. 218, 449-461 (2011).
- Christensen, J. A., Skaarland, E. Nuclear and cell area measurements in the cytological evaluation of pleural effusions: a study of subjective assessments and morphometric measurements. Diag Cytopathol. 3, 50-54 (1987).
