Summary

מודלים ניסיוניים לחקר הנוירו-פרוטקציה של התסמינים החומציים נגד איסכמיה מוחית

Published: July 31, 2017
doi:

Summary

Accic postconditioning מגן מפני איסכמיה מוחית. כאן אנו מציגים שני מודלים לביצוע APC. הם מושגים בהתאמה על ידי העברת פרוסות corticostriatal למאגר חומצי לאחר מחסור בגלוקוז חמצן במבחנה ועל ידי שאיפה 20% CO 2 לאחר חסימת עורק המוח התיכון in vivo .

Abstract

שבץ הוא אחד הגורמים המובילים לתמותה ולמוגבלות ברחבי העולם, עם גישות טיפוליות מוגבלות. כאסטרטגיה אנדוגנית עבור neuroprotection, טיפולים postconditioning הוכיחו להיות טיפולים מבטיחים נגד איסכמיה מוחית. עם זאת, נהלים מורכבים ובעיות בטיחות פוטנציאליות להגביל את היישום הקליני שלהם. כדי להתגבר על החסרונות הללו, פיתחנו חומצה postconditioning (APC) כטיפול לאיסכמיה מוחית ניסויית ניסויית. APC מתייחס לטיפול acidosis מתון על ידי שאיפה CO 2 במהלך reperfusion בעקבות איסכמיה. כאן אנו מציגים שני מודלים לבצע APC במבחנה in vivo , בהתאמה. מחסור בגלוקוז חמצן (OGD) טיפול בעכברים ואת חסימת corticostriatal ואת חסימת עורק המוח התיכון (MCAO) של עכברים הועסקו לחקות איסכמיה מוחית. APC יכול להיות מושגת רק על ידי העברת פרוסות מוח חיץ חומצי מבעבע עם 20% CO 2, oR על ידי עכברים inhaling 20% ​​CO 2 . APC הראה השפעות הגנה משמעותיות נגד איסכמיה מוחית, כפי שמשתקף על ידי הכדאיות רקמות נפח המוח באוטם.

Introduction

שבץ הוא אחד הגורמים המובילים לתמותה ולנכות ברחבי העולם. מאמצים רבים נעשו כדי למצוא טיפולים יעילים לשבץ בעשורים האחרונים, עם זאת, ההישג הוא די משביע רצון. התנאי הוא תהליך המניפולטיבי על ידי דחקים מתוחים בעקבות אפיזודה איסכמית. בנוסף, כולל איסכמי, היפוקסי, גלוקוז נמוך, postconditioning איסכמי מרחוק, המנגנונים אנדוגניים אדפטיבית להפעיל, הוכחו להיות טיפולים מבטיחים נגד איסכמיה מוחית 1 , 2 , 3 , 4 . עם זאת, postconditioning איסכמי עלול להציג פגיעה נוספת. אימבסיס מרחוק איסכמי postconditioning בדרך כלל צריך כמה מחזורים של 5-20 דקות חסימה reperfusion על אימפיטלי ips צדדית או דו צדדית 5 , 6 , 7 . תלכן, המניפולציות האלה שלאחר המוות הן מסוכנות או לא מעשיות בתרגול הקליני. כדי להתגבר על החסרונות הללו, פיתחנו APC כטיפול לאיסכמיה מוחית מוקדמת בעכברים 8 . המושרה פשוט על ידי שאיפת 20% CO 2 , APC מפחית באופן משמעותי את פגיעה מוחית איסכמית בצורה בריאה יותר ובטוחה יותר. לאחרונה הוכחנו כי APC מרחיב את חלון reperfusion, המדגיש את המשמעות של APC לטיפול שבץ 9 .

כאן אנו מציגים שני מודלים ניסיוניים כדי לחקור את neuroprotection של APC נגד איסכמיה מוחית. הראשון הוא מחסור בגלוקוז חמצן (OGD) מודל פרוסות corticostriatal עכברים. הכנה מהירה והעברה של פרוסות המוח לסביבה מלאכותית, בדרך כלל נוזל מוחי מלאכותי (ASCF), יכולים לשמור על כדאיות התא ומעגלים נוירונים, המאפשרים ללמוד תפקוד מוחי במבחנה 10 <Sup>, 11 . OGD ב ASCF מחקה איסכמיה מוחית וגורמת פגיעה איסכמית 12 , 13 , 14 . לאחר OGD, פרוסות המוח מתרעננות באופן קבוע ASCF (r-ASCF) כדי לספק reperfusion ולאחר מכן מטופלים עם APC באמצעות ASCF חומצי מבעבע עם 20% CO 2 . פרוסת corticostriatal שומרת על אפיון היסטולוגית שלם לעומת תאים מתורבת העיקרי.

כדי לחקור את תפקוד המוח in vivo , עכבר באמצע מוחי חסימה עורק (MCAO) המודל מועסק. העורק המוחי האמצעי נחסם על ידי החדרת מונופילמנט להבה- blunted דרך עורק הצוואר המשותף. בתור אחד המודולים שבץ הנפוץ ביותר, מודל MCAO מראה הרלוונטיות הקלינית ואת היישום של monofilament מקל יותר להשיג reperfusion. פשוט על ידי שאיפת גז מעורבים normoxic המכיל 20% CO 2 לאחר הופעת reperfusioN, APC הראו השפעות הגנה משמעותיות נגד איסכמיה מוחית המצוינת על ידי נפח מופחת של המוח.

Protocol

כל הניסויים אושרו על ידי ונערכו בהתאם לקווים המנחים האתיים של ועדת הניסוי של אוניברסיטת ג'ה-ג'יאנג, ועמדו בהתאמה מלאה עם המכונים הלאומיים לבריאות הציבור לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה. נעשו מאמצים כדי למזער כל כאב או אי-נוחות, והשתמש במספר המינימלי של בעלי-חיים. <p cl…

Representative Results

במודל פרוסה corticostriatal שתואר לעיל, הכדאיות פרוסת corticostriatal היה לכמת על ידי assay TTC ב 1 שעות לאחר reperfusion. המרת TTC חושבה על ידי מנרמל את הקליטה ב 490 ננומטר לשליטה מלאה. על פי TTC המרה, APC מוגן מפני OGD- המושרה reperfusion פציעה בזמן התחלה משך תלוי. בפירוט, הן 1 ו 3 דקות של טי?…

Discussion

כאן אנו מציגים שני מודלים ניסיוניים כדי לחקור את neuroprotection של APC נגד איסכמיה מוחית. ב פרוסות המוח, APC מושגת על ידי דוגרים עכברים פרוסות corticostriatal חיץ חומצי מבעבע עם 20% CO 2 לאחר הופעת reperfusion, בעוד המודל MCAO, APC מושגת על ידי שאיפת 20% CO 2 לעכברים לאחר reperfusion. שני המודלים…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו מומנה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81573406, 81373393, 81273506, 81221003, 81473186, 81473186 ו 81402907), Zhejiang מחוזי מדעי הטבע הקרן (LR15H310001) ואת התוכנית עבור Zhejiang צוות מוביל של S & T חדשנות צוות (2011R50014).

Materials

Sodium chloride Sigma S5886
Potassium chloride Sigma P5405
Potassium phosphate monobasic Sigma P9791
Magnesium sulfate Sigma M2643
Sodium bicarbonate Sigma S5761
Calcium chloride dihydrate Sigma C5080
D-(+)-Glucose Sigma G7021
Vibratome Leica VT1000 S
2,3,5-triphenyltetrazolium hydrochloride Sigma T8877
Absolute Ethanol Aladdin Industrial Corporation E111993
Dimethyl sulfoxide Sigma D8418
Laser Doppler Flowmetry Moor Instruments Ltd Model Moor VMS-LDF2
Diethyl ether anhydrous Sinopharm Chemical Reagent Corporation 80059618
Trichloroacetaldehycle hydrate Sinopharm Chemical Reagent Corporation 30037517
10% Formalin Aladdin Industrial Corporation F111936
24-well plates Jet Biofil TCP-010-024

Referenzen

  1. Zhao, H., Sapolsky, R. M., Steinberg, G. K. Interrupting reperfusion as a stroke therapy: ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (9), 1114-1121 (2006).
  2. Leconte, C., et al. Delayed hypoxic postconditioning protects against cerebral ischemia in the mouse. Stroke. 40 (10), 3349-3355 (2009).
  3. Fan, Y. Y., et al. Transient lack of glucose but not O2 is involved in ischemic postconditioning-induced neuroprotection. CNS Neurosci Ther. 19 (1), 30-37 (2013).
  4. Hess, D. C., Hoda, M. N., Bhatia, K. Remote limb perconditioning [corrected] and postconditioning: will it translate into a promising treatment for acute stroke. Stroke. 44 (4), 1191-1197 (2013).
  5. Ren, C., Yan, Z., Wei, D., Gao, X., Chen, X., Zhao, H. Limb remote ischemic postconditioning protects against focal ischemia in rats. Brain Res. 1288, 88-94 (2009).
  6. Sun, J., et al. Protective effect of delayed remote limb ischemic postconditioning: role of mitochondrial K(ATP) channels in a rat model of focal cerebral ischemic reperfusion injury. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (5), 851-859 (2012).
  7. Li, P., et al. Remote limb ischemic postconditioning protects mouse brain against cerebral ischemia/reperfusion injury via upregulating expression of Nrf2, HO-1 and NQO-1 in mice. Int J Neurosci. , 1-8 (2015).
  8. Fan, Y. Y., et al. A novel neuroprotective strategy for ischemic stroke: transient mild acidosis treatment by CO2 inhalation at reperfusion. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (2), 275-283 (2014).
  9. Shen, Z., et al. PARK2-dependent mitophagy induced by acidic postconditioning protects against focal cerebral ischemia and extends the reperfusion window. Autophagy. , (2017).
  10. Skolnik, J., Takacs, L., Szende, E. In vitro oxygen consumption of slices from kidney, brain, cortex and liver in hypoxia. Nature. 209 (5020), 305 (1966).
  11. Lynch, G., Schubert, P. The use of in vitro. brain slices for multidisciplinary studies of synaptic function. Annu Rev Neurosci. 3, 1-22 (1980).
  12. Zheng, S., Zuo, Z. Isoflurane preconditioning reduces purkinje cell death in an in vitro model of rat cerebellar ischemia. Neurowissenschaften. 118 (1), 99-106 (2003).
  13. Yin, B., Barrionuevo, G., Weber, S. G. Optimized real-time monitoring of glutathione redox status in single pyramidal neurons in organotypic hippocampal slices during oxygen-glucose deprivation and reperfusion. ACS Chem Neurosci. 6 (11), 1838-1848 (2015).
  14. Medvedeva, Y. V., Ji, S., Yin, H. Z., Weiss, J. H. Differential vulnerability of CA1 vs CA3 pyramidal neurons after ischemia: possible relationship to sources of Zn2+ accumulation and its entry into and prolonged effects on mitochondria. J Neurosci. , (2016).
  15. Pignataro, G., et al. In vivo and in vitro characterization of a novel neuroprotective strategy for stroke: ischemic postconditioning. J Cereb Blood Flow Metab. 28 (2), 232-241 (2008).
  16. Zhang, X., Ding, H. Z., Jiang, S., Zeng, Y. M., Tang, Q. F. An in vitro study of the neuroprotective effect of propofol on hypoxic hippocampal slice. Brain Inj. 28 (13-14), 1758-1765 (2014).
  17. Niu, Y., et al. Chemical profiling with HPLC-FTMS of exogenous and endogenous chemicals susceptible to the administration of chotosan in an animal model of type 2 diabetes-induced dementia. J Pharm Biomed Anal. 104, 21-30 (2015).

Play Video

Diesen Artikel zitieren
Zheng, Y., Shen, Z., Wu, X., Jiang, L., Hu, W., Chen, Z., Zhang, X. Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia. J. Vis. Exp. (125), e55931, doi:10.3791/55931 (2017).

View Video