أخذ عينات دم الوريد تحت الترقوة في الفئران الواعية
Summary
نقدم هنا مزيجا من القيود الفعالة للفئران وطرق ثقب الوريد تحت الترقوة التي تمكن من جمع الدم بسرعة وأمان وتكرار في الفئران دون تخدير.
Abstract
هناك العديد من الطرق المعمول بها للحصول على عينات دم متكررة من الفئران ، مع أكثر الطرق المستخدمة شيوعا هي أخذ عينات الوريد الجانبي بدون تخدير وأخذ عينات الوريد الوداجي مع التخدير. ومع ذلك ، فإن معظم هذه الطرق تتطلب المساعدة ومعدات التخدير وأحيانا تشكل صعوبات من حيث جمع الدم أو رداءة نوعية عينات الدم. بالإضافة إلى ذلك ، تستهلك طرق جمع الدم هذه وقتا كبيرا وموارد بشرية عندما يكون أخذ عينات الدم المتكررة مطلوبا لعدد كبير من الفئران. تقدم هذه الدراسة تقنية لأخذ عينات الدم المتكررة في الفئران غير المخدرة من قبل فرد واحد بارع. يمكن الحصول على عينات دم مرضية للغاية عن طريق ثقب الوريد تحت الترقوة. أظهرت الطريقة معدل نجاح إجمالي مثير للإعجاب بنسبة 95٪ ، مع متوسط وقت يبلغ 2 دقيقة فقط من ضبط الفئران إلى الانتهاء من جمع الدم. علاوة على ذلك ، فإن إجراء عمليات جمع دم متتالية ضمن النطاق المحدد لا يلحق أي ضرر بالفئران. هذه الطريقة تستحق الترويج لجمع الدم ، خاصة في دراسات الحرائك الدوائية واسعة النطاق.
Introduction
الفئران هي واحدة من أكثر التجارب شيوعا ، وهناك العديد من الطرق للحصول على عينات الدم. بالنسبة للتجارب التي تتضمن جمع دم واحد في المرحلة الختامية ، يمكن الحصول على كمية كافية من الدم من خلال ثقب القلب أو جمع الدم من الشريان الأورطي البطني1. ومع ذلك ، تتطلب بعض الدراسات جمع الدم المتكرر من الفئران للدم الروتيني أو التحليل الكيميائي الحيوي ، خاصة في دراسات الحرائك الدوائية والسموم ، حيث يلزم جمع الدم المتكرر لتحديد امتصاص الأدوية وتوزيعها واستقلابها2.
حاليا ، على الرغم من أن جمع الدم في الوريد الذيل هو الطريقة الأكثر شيوعا لأخذ عينات الدم من الفئران ، على الرغم من عدم الحاجة إلى التخدير ، إلا أن هذه الطريقة يمكن أن تكون صعبة بالنسبة للمجموعات المتكررة ، وحجم الدم الذي تم جمعه صغير نسبيا 3,4. بالإضافة إلى ذلك ، على الرغم من أنه يمكن جمع الدم من الأوردة الصافن والقضيب ، إلا أن كمية الدم التي تم الحصول عليها محدودة ، والتخدير مطلوب 1,5. علاوة على ذلك ، توفر عينات الدم التي تم جمعها من الضفيرة الوريدية تحت الفك السفلي ، وكذلك الأوردة تحت اللسان والوداجية وتحت الترقوة عينات عالية الجودة ولكنها تتطلب عادة تخديرا أو مساعدة عدة أفراد1،6،7،8،9. أخيرا ، لا يتطلب جمع الدم من الجيوب الأنفية / القناة خلف الحجاج تخديرا فحسب ، بل قد يتسبب أيضا في إصابة وإجهاد الفئران9.
عادة ما تكون جودة عينات الدم التي يتم الحصول عليها من الأوردة الرئيسية من أعلى المعايير1. في الوقت الحاضر ، وجدت بعض الدراسات أن أخذ العينات المجهرية المستمرة من خلال الوريد الوداجي هو طريقة مناسبة جدا للبحث السمي في الفئران على الرغم من أن هذه الطريقة تتطلب عادة قسطرة الوريد الوداجي10،11،12. لذلك ، يجدر استكشاف كيفية الحصول على عينات دم عالية الجودة وفقا لمبدأ 3R للبحوث الحيوانية دون تدخل جراحي. كان الهدف من هذه الدراسة هو تقديم طريقة لاستخراج الدم بكفاءة من الوريد تحت الترقوة في الفئران. تتيح هذه التقنية الجمع السريع للعينات المرضية من خلال إجراء شخص واحد دون الحاجة إلى التخدير.
Protocol
Representative Results
Discussion
على الرغم من أن جمع الدم في الوريد الذيل هو الطريقة الأكثر شيوعا لأخذ عينات الدم المتكررة في الفئران ، إلا أنه قد يتأثر بأدوية التخدير ، وبسبب صغر حجم الوريد الذيل ، فإن كمية الدم التي يمكن جمعها في حالة واحدة محدودة ، مما يؤدي إلى مدة أطول لجمع الدم 4,5. على ال…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذه الدراسة من قبل مشروع خطة Cuiying للمستشفى الثاني بجامعة لانتشو (Grant No. PR0121015) والمختبر الرئيسي لمقاطعة قانسو لبحوث أمراض الجهاز البولي (المنحة رقم 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
Referenzen
- . Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022)
- Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).
- Liu, X., et al. Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier. Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).
- Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
- Charlès, L., et al. Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model. Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).
- Wang, L., et al. Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat. Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).
- Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
- Tochitani, T., et al. Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).
- Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., Sørensen, D. B. A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare. Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).
- Yokoyama, H., et al. Lack of toxicological influences by microsampling (50 µL) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).
- Perciedu Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).
- Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
- Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. A review of pain assessment methods in laboratory rodents. Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).
- Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters. The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).
- Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats. Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).
