의식이 있는 쥐의 쇄골하 정맥 혈액 샘플링
Summary
여기에서는 마취 없이 쥐에서 빠르고 안전하며 반복적인 채혈을 가능하게 하는 효과적인 쥐 제한과 쇄골하 정맥 천자 방법의 조합을 제시합니다.
Abstract
쥐로부터 반복적인 혈액 샘플을 얻기 위한 몇 가지 확립된 방법이 있으며, 가장 일반적으로 사용되는 방법은 마취 없는 측면 꼬리 정맥 샘플링과 마취를 통한 경정맥 샘플링입니다. 그러나 이러한 방법의 대부분은 도움과 마취 장비가 필요하며 때로는 혈액 채취 또는 혈액 샘플의 품질이 좋지 않은 측면에서 어려움을 겪습니다. 또한 이러한 채혈 방법은 많은 수의 쥐에 대해 반복적인 혈액 샘플링이 필요할 때 상당한 시간과 인적 자원을 소비합니다. 이 연구는 숙련된 단일 개인이 마취되지 않은 쥐에서 반복적인 혈액 샘플링 기술을 제시합니다. 매우 만족스러운 혈액 샘플은 쇄골하 정맥에 구멍을 뚫어 얻을 수 있습니다. 이 방법은 쥐 억제에서 채혈 완료까지 평균 2분에 불과한 95%의 인상적인 전체 성공률을 보여주었습니다. 또한 지정된 범위 내에서 연속적인 채혈을 수행해도 쥐에게 해를 끼치 지 않습니다. 이 방법은 특히 대규모 약동학 연구에서 혈액 수집을 위해 홍보할 가치가 있습니다.
Introduction
쥐는 가장 흔한 실험 동물 중 하나이며 혈액 샘플을 얻는 방법에는 여러 가지가 있습니다. 최종 단계에서 단일 채혈을 포함하는 실험의 경우, 심장 천자 또는 복부 대동맥 채혈을 통해 충분한 양의 혈액을 얻을 수 있다1. 그러나 일부 연구에서는 일상적인 혈액 또는 생화학적 분석을 위해 쥐의 반복적인 혈액 채취가 필요하며,특히 약물의 흡수, 분포 및 대사를 결정하기 위해 반복적인 혈액 채취가 필요한 약동학 및 독성학 연구에서 2.
현재 꼬리 정맥 채혈이 쥐의 혈액 채취에 가장 일반적인 방법이지만 마취가 필요하지 않음에도 불구하고 이 방법은 반복적인 채혈이 어려울 수 있으며 채혈된 혈액의 양은 상대적으로 적습니다 3,4. 또한 복재정맥과 음경정맥에서 혈액을 채취할 수 있지만 채취하는 혈액의 양이 제한되어 있어 마취가 필요하다 1,5. 또한, 턱밑 정맥총과 설하정맥, 경정맥 및 쇄골하 정맥에서 채취한 혈액 샘플은 더 높은 품질의 샘플을 제공하지만, 일반적으로 마취 또는 여러 사람의 도움이 필요하다 1,6,7,8,9. 마지막으로, 후안와동/관내 채혈은 마취를 필요로 할 뿐만 아니라 잠재적으로 쥐에게 부상과 스트레스를 유발할 수 있다9.
일반적으로 주요 정맥에서 채취한 혈액 샘플의 품질은 일반적으로 최고 수준이다1. 현재, 일부 연구에서는 경정맥을 통한 연속 미세 샘플링이 쥐의 독성 연구에 매우 적합한 방법임이 밝혀졌지만, 이 방법은 일반적으로 경정맥 카테터 삽입을 필요로 한다 10,11,12. 따라서 외과적 개입 없이 동물 연구의 3R 원칙에 따라 고품질 혈액 샘플을 얻는 방법을 탐구할 가치가 있습니다. 이 연구의 목적은 쥐의 쇄골하 정맥에서 혈액을 효율적으로 추출하는 방법을 제시하는 것이었습니다. 이 기술을 사용하면 마취 없이 한 사람 절차를 통해 만족스러운 샘플을 신속하게 수집할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
꼬리 정맥 채혈은 쥐의 반복 혈액 채취를 위한 가장 일반적인 방법이지만, 마취제의 영향을 받을 수 있으며, 꼬리 정맥의 크기가 작기 때문에 한 번에 채취할 수 있는 혈액의 양이 제한되어 채혈 시간이 길어진다 4,5. 쥐 꼬리 정맥의 모세관 마이크로샘플링(CMS)과 결합된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)-탠덤 질량분석법(MS/MS) 시스템은 쥐에서 사용되는 …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 란저우 대학 제2병원의 Cuiying Plan Project(Grant No. PR0121015) 및 간쑤성 비뇨기계 질환 연구 핵심 연구소(보조금 번호 0412D2).
Materials
| 0.75% normal saline | Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd. | —— | Prepared heparin sodium solution |
| 1 mL Pasteur pipette | Biosharp | BS-XG-01-NS | Blood collection |
| 1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm) | Shinva Medical Instrument Co.,Ltd. | 0.45*12RWLB | Blood collection |
| 1.5 mL Eppendorf tube | Biosharp | BS-15-M | Blood storage and collection |
| 75% medical alcohol | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | —— | Disinfection of rat blood collection site |
| Centrifuge tube holder | Biosharp | BS-05/15-SM60 | —— |
| Electronic scale | Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd. | JE1002 | Weigh |
| Heparin sodium injection | Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. | —— | Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL |
| Low temperature centrifuge | HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument Co., Ltd. | H1750R | Separation of serum |
Referenzen
- . Blood collection: The rat IACUC Guideline Available from: https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022)
- Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).
- Liu, X., et al. Modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier. Journal of Visualized Experiments. (144), e65513 (2019).
- Zou, W., et al. Repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system. Journal of Visualized Experiments. (130), e55852 (2017).
- Charlès, L., et al. Modified tail vein and penile vein puncture for blood sampling in the rat model. Journal of Visualized Experiments. (196), e65513 (2023).
- Wang, L., et al. Repetitive blood sampling from the subclavian vein of conscious rat. Journal of Visualized Experiments. (180), e63439 (2022).
- Yang, H., et al. Subclavian vein puncture as an alternative method of blood sample collection in rats. Journal of Visualized Experiments. (141), e58499 (2018).
- Tochitani, T., et al. Effects of microsampling on toxicity assessment of hematotoxic compounds in a general toxicity study in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 47 (7), 269-276 (2022).
- Harikrishnan, V. S., Hansen, A. K., Abelson, K. S., Sørensen, D. B. A comparison of various methods of blood sampling in mice and rats: Effects on animal welfare. Laboratory Animals. 52 (3), 253-264 (2018).
- Yokoyama, H., et al. Lack of toxicological influences by microsampling (50 µL) from jugular vein of rats in a collaborative 28-day study. The Journal of Toxicological Sciences. 45 (6), 319-325 (2020).
- Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- National Research Council of the National Academies, Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).
- Perciedu Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. The Journal of Physiology. 598 (18), 3793-3801 (2020).
- Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
- Turner, P. V., Pang, D. S., Lofgren, J. L. A review of pain assessment methods in laboratory rodents. Comparative Medicine. 69 (6), 451-467 (2019).
- Kurata, M., Misawa, K., Noguchi, N., Kasuga, Y., Matsumoto, K. Effect of blood collection imitating toxicokinetic study on rat hematological parameters. The Journal of Toxicological Sciences. 22 (3), 231-238 (1997).
- Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats. Laboratory Animals. 32 (4), 369-376 (1998).
