Kultur myeloide dendritische Zellen aus dem Knochenmark Vorstufen
Summary
Dieses Video zeigt das Verfahren zur Unterscheidung myeloide dendritische Zellen aus dem Knochenmark der Maus. Isolierung von Maus Schienbein und Oberschenkelknochen, und die Verarbeitung von Knochenmark nachgewiesen. Bilder zeigen Zellmorphologie vor und nach der Differenzierung und Figurengruppen Zellphänotyp und IL-12 Produktion nach der Reifung mit CpG gezeigt.
Abstract
Myeloide dendritische Zellen (DCs) werden häufig verwendet, um die Wechselwirkungen zwischen angeborenen und erworbenen Immunmechanismen und die frühe Reaktion auf eine Infektion zu studieren. Da diese die stärksten Antigen-präsentierende Zellen sind, sind DCs zunehmend als Impfstoff Vektor verwendet, um die Induktion von Antigen-spezifische Immunantwort zu untersuchen. In diesem Video zeigen wir, das Verfahren für die Ernte tibias und Oberschenkelknochen von einem Spender-Maus,-verarbeitung im Knochenmark und Differenzierung DCs in vitro. Die Eigenschaften der DCs ändern nach Stimulation: unreife dendritische Zellen sind potente Phagozyten, während reife DCs in der Lage Antigen-Präsentation und Interaktion mit CD4 + und CD8 + T-Zellen sind. Diese Veränderung in der funktionellen Aktivität entspricht der Hochregulation von Zelloberflächenmarker und Zytokin-Produktion. Viele Mittel können zu reifen DCs, darunter Zytokine und Toll-like-Rezeptor-Liganden verwendet werden. In diesem Video zeigen wir durchflusszytometrische Vergleiche der Expression von zwei Co-stimulatorischen Molekülen, CD86 und CD40, und das Zytokin IL-12 nach Stimulation mit CpG über Nacht oder mock-Behandlung. Nach Differenzierung kann DCs weiter für die Verwendung als Impfstoff-Vektor manipuliert oder Antigen-spezifische Immunantwort durch in vitro zu erzeugen pulsierende Verwendung von Peptiden oder Proteinen, oder transduziert mit rekombinanten viralen Vektoren.
Protocol
Discussion
DCs sind für das Studium der angeborenen und adaptiven Immunsystems Interaktionen nützlich, und kann als Impfstoffvektor eingesetzt werden. In diesem Video haben wir die Schritte, um Knochenmark zu isolieren und zu differenzieren myeloide dendritische Zellen in vitro nachgewiesen. Nach der Kulturzeit, können diese Zellen mikroskopisch visualisiert werden sowohl als adhärente Zellen, die oft über Dendriten, und nicht haftende Rundzellen. Die DCs können weitere für die Antigen-Präsentation werden von Pulsen mit Antigen manipuliert ode…
Acknowledgements
JB ist studentships aus dem Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) unterstützt. Unterstützung für dieses Projekt wurde von der Canadian Institutes of Health Research vorgelegt, Grant MOP-67066.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
Referenzen
- Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
- Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117, 1195-1203 (2007).
