骨髄前駆細胞から骨髄樹状細胞の培養
Summary
このビデオでは、マウスの骨髄から骨髄樹状細胞を区別するための手順を示しています。マウス脛骨と大腿骨、および骨髄の処理の分離が実証されています。細胞の表現型とのCpGを用いてIL – 12産生は、次の成熟を描いた分化する前と後の細胞形態を示す写真、および数値は示されている。
Abstract
骨髄樹状細胞（DC）は頻繁に自然免疫と獲得免疫機構と感染症への早期対応との間の相互作用を研究するために使用されます。これらは、最も強力な抗原提示細胞であるため、DCがますます抗原特異的免疫応答の誘導を研究するためにワクチンのベクターとして使用されています。このビデオでは、我々はin vitroで骨髄と差別化樹状細胞を処理し、ドナーマウスから脛骨と大腿骨を採取するための手順を示しています。刺激後に樹状細胞の変化の性質：成熟DCは+ T細胞のCD4 +とCD8を持つ抗原提示と相互作用することが可能であるのに対し、未成熟樹状細胞は、強力な食細胞である。機能活性の変化は、細胞表面マーカーやサイトカイン産生のアップレギュレーションに対応しています。多数のエージェントは、サイトカインとToll様受容体リガンドを含む成熟DC、するために使用することができます。このビデオでは、我々は、CpGまたはモック治療で一晩刺激後に、二つの共刺激分子、CD86とCD40、およびサイトカイン、IL – 12の発現のフローサイトメトリーの比較を示す。分化した後、樹状細胞は、さらにワクチンのベクトルとして使用するために操作することができるまたはin vitroでのペプチドまたはタンパク質を用いてパルスする抗原特異的免疫応答を生成する、または組換えウイルスベクターを用いた形質導入。
Protocol
Discussion
樹状細胞は自然免疫と獲得免疫の相互作用の研究に有用であり、ワクチンのベクトルとして用いることができる。このビデオでは、我々は、骨髄を分離し、in vitroで骨髄樹状細胞を区別するための手順を示している。培養期間に続いて、これらの細胞を顕微鏡の両方のような付着が多い樹状突起を持つ細胞と、非接着性円形細胞を可視化することができます。樹状細胞は、さらに抗原でパルスすること?…
Acknowledgements
JBは、自然科学と工学研究評議会（NSERC）からstudentshipsによってサポートされています。このプロジェクトのサポートは、グラントはMOP – 67066、カナダ衛生研究所によって提供されています。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
Referenzen
- Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
- Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117, 1195-1203 (2007).
