والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول للمساعدة في نقل التعلم النووية.
Abstract
يمكن نقل النووي في بويضة غير مخصبة استعادة التنموية المحتملة للخلية متمايزة. هذا يدل على أن عمليات التنمية الأساسية ، والتمايز والشيخوخة هي اللاجينية بدلا من العمليات الجينية. على عكس هذه العمليات تفتح آفاقا مثيرة في البحوث الأساسية ، وأكثر في المستقبل البعيد ، في مجال الطب التجديدي. في الماوس ، يمكن اشتقاق خلايا جذعية جنينية من أجنة مستنسخة المرحلة سابق للانغراس. مثل الخلايا الجذعية الجنينية لديها القدرة على أن تؤدي إلى جميع أنواع الخلايا للكائن أخلاقي. الأهم من ذلك ، هذه الخلايا متطابقة وراثيا إلى الجهة المانحة. إذا كان ينطبق على الإنسان ، وهذا من شأنه أن يسمح للاشتقاق الخلايا الجذعية من المريض. ويمكن عندئذ أن تكون هذه الخلايا المتمايزة في نوع من الخلايا المتضررة للمريض ، ودرس في المختبر ، أو استخدامها لتحل محل الخلايا التالفة أو المفقودة. دراسة نقل النووي في الفأر لا يزال هاما لأنها يمكن أن تبلغنا عن مبادئ برمجة النووية. والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول المرافق له للمساعدة في تعلم نقل النووي في الفأر ، وهو أسلوب وضعت في البداية في مجموعة من Yanagimachi الأستاذ (اكاياما وآخرون 1998).
Protocol
التحضير : ويمكن العثور على وصف تفصيلي لفرط الإباضة وmicrodrop ثقافة الجنين في مكان آخر 2. إعداد طبق بتري مع microdrops من مستنبت جنين (على سبيل المثال KSOM ، Chemicon). مع تغطية الزيو…
Discussion
حظا سعيدا!
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأود أن أشكر DE الدكتور إخفاء Akutsu لتقاسم له NT الحيل والدكتور ستيفن وسوليفان غاريت Birkhoff لقراءة نقدية للبروتوكول.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Cytochalastin B
Sigma
100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride
10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts
Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts
Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA
Sigma
P-8136
cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP
Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP
ICN Biochemicals
MW 360000
Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.