Ядерная передача в ооциты мыши
Summary
Этот фильм и протокол призваны помочь обучению переноса ядра.
Abstract
Ядерные передачи в неоплодотворенные яйцеклетки может восстановить потенциал развития в дифференцированные клетки. Это показывает, что процессы, лежащие развития, дифференциации и старения эпигенетические, а не генетические процессы. Обратимость этих процессов открывает захватывающие перспективы в области фундаментальных исследований, а в более отдаленном будущем, в регенеративной медицине. В мыши, эмбриональные стволовые клетки могут быть получены из клонированных эмбрионов предимплантационной стадии. Такие эмбриональные стволовые клетки обладают способностью давать начало всем типам клетка взрослого организма. Важно, что эти клетки генетически идентичны донору. Если это применимо к человеку, это позволило бы вывод стволовые клетки пациента. Эти клетки могут затем быть дифференцированы в пострадавших типа клеток самого пациента и учился в пробирке, или использоваться для замены поврежденных или отсутствующих клеток. Изучение переноса ядра в мышь по-прежнему важно, как он может сообщить нам о принципах ядерного перепрограммирования. Этот фильм и сопровождающие протокол призваны помочь обучению переноса ядра в мышь, метод разработан в группе профессора Уапа (Вакаяма и соавт. 1998).
Protocol
Discussion
Удачи!
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE хотели бы поблагодарить д-ра Скрыть Akutsu для обмена его NT трюки и д-р Стивен Салливан и Гаррета Биркгофа для критических чтение протокола.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
Referencias
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
