Trasferimento nucleare in oociti mouse

Summary

Questo film e il protocollo hanno lo scopo di aiutare l'apprendimento di trasferimento nucleare.

Abstract

Trasferimento nucleare in un ovocita non fecondato in grado di ripristinare il potenziale di sviluppo di una cellula differenziata. Questo dimostra che i processi alla base dello sviluppo, la differenziazione e l'invecchiamento sono epigenetiche, piuttosto che processi genetici. La reversibilità di questi processi si apre interessanti prospettive nella ricerca di base, e in un futuro più lontano, nella medicina rigenerativa. Nel topo, le cellule staminali embrionali possono essere derivate da embrioni clonati fase preimpianto. Tali cellule staminali embrionali hanno la capacità di dare origine a tutti i tipi di cellule dell'organismo adulto. È importante sottolineare che queste cellule sono geneticamente identiche al donatore. Se applicabile a uomo, ciò permetterebbe la derivazione di cellule staminali da un paziente. Queste cellule potrebbero poi essere differenziate nel tipo di cellula colpita del paziente e studiate in vitro, o utilizzati per sostituire le cellule danneggiate o mancanti. Lo studio del trasferimento nucleare nel topo rimane importante perché ci può diffondere i principi della riprogrammazione nucleare. Questo film e il protocollo di accompagnamento hanno lo scopo di aiutare l'apprendimento trasferimento nucleare nel topo, un metodo sviluppato inizialmente nel gruppo del Prof. Yanagimachi (WAKAYAMA et al. 1998).

Protocol

Preparazioni: Una descrizione dettagliata di superovulazione e di coltura degli embrioni MicroDrop può essere trovato altrove 2. Preparare una capsula di Petri con microgocce di medio dell'embrione cultura (ad esempio KSOM, Chemicon). Coprite con olio minerale (olio minerale lotti dovrebbero essere testati per la compatibilità con la cultura degli embrioni). Equilibrare a 37 ° C in aria più il 5% di CO 2. (In Thermo-Electron acqua inc…

Discussion

Buona fortuna!

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Cytochalastin B		Sigma		100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride				10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts				Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts				Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA		Sigma	P-8136	cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP				Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP		ICN Biochemicals		MW 360000

Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.