变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳（尿素页）
Summary
变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离单链DNA或RNA的500个核苷酸的限制。在热变性样品和非结构化的单链结合的尿素凝胶基质内迁移，根据其分子量。
Abstract
尿素页面或变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳采用6-8 M尿素，变性中学的DNA或RNA的结构，是他们根据分子量聚丙烯酰胺凝胶矩阵分离。 2至500个碱基之间的片段，如单核苷酸长度的差异，可以分开使用此方法1。样品的迁移是依赖于所选择的丙烯酰胺浓度。一个比例更高的聚丙烯酰胺解决了低分子量的碎片。尿素和温度为45-55 ° C进行组合，在凝胶运行允许非结构化的DNA或RNA分子的分离。
在一般情况下，这种方法是必需的单链DNA或RNA片段，合成或标记的寡核苷酸酶裂解反应的产品，如分析或净化。
在这个视频文章中，我们展示了如何准备和运行变性尿素聚丙烯酰胺凝胶。包括技术秘诀，除了原有的协议1,2。
Protocol
为这一实验过程的完整和详细的文字协议是在分子生物学中的电流的协议。 BioRad公司网站3上可以找到详细的一步一步的组装凝胶三明治和凝胶仪器的指示。 所需设备： 玻璃板（内层和外层） 10厘米的电池：10.1 × 7.3厘米（内板），10.1 × 8.2厘米（外盘），BioRad公司 20厘米的电池：20 x 20厘米（内板），20 × 22.3厘米（外盘），BioRad公司 0.5-1.5毫米凝胶…
Discussion
- 带的清晰度取决于几个因素。夏普带装样量应尽可能小，即理想之间的1-5μL。然而，到15μL可装载仍然确保接受的解决办法。样品量少，更清晰的频段量结果。
- 该乐队的质量也取决于凝胶的厚度。稀释剂的凝胶，如0.75毫米，大于1.5毫米厚的凝胶显示较好的效果。
- 乐队的形状也可以在凝胶加载的影响，如果样品是不能进入凝胶的口袋里同样适用。包括10％的装载缓冲甘油有助于在凝胶装载和更容?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由新加坡的学术研究理事会（ARC）[授予数量90/07]支持。我们感谢支持球菌。
Referencias
- Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Bioquímica. 14, 3787-3794 (1975).
- Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).
- . . PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).
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Denaturing Urea Polyacrylamide Gel ElectrophoresisUrea PAGEDNA SeparationRNA SeparationPolyacrylamide Gel MatrixMolecular Weight SeparationAcrylamide ConcentrationLower Molecular Weight FragmentsUnstructured DNA Or RNA MoleculesSingle Stranded DNASingle Stranded RNAOligonucleotidesEnzymatic Cleavage ReactionsGel PreparationGel Running
Citar este artículo
Summer, H., Grämer, R., Dröge, P. Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE). J. Vis. Exp. (32), e1485, doi:10.3791/1485 (2009).