Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging
Summary
De montage van een nearfield infrarood microscoop voor beeldvorming proteïneaggregaten wordt beschreven.
Abstract
Dit document heeft tot doel de lezer te onderwijzen in de assemblage en de werking van een infrarood-nabije-veld microscoop voor beeldvorming verder dan de diffractielimiet. De apertureless nabije-veld microscoop is een lichtverstrooiing-type instrument dat infrarood spectra geeft aan circa 20 nm resolutie. Een complete lijst van componenten en een stap-voor-stap protocol voor het gebruik is voorzien. Voorkomende fouten in de montage en tuning instrument worden besproken. Een representatieve dataset die de secundaire structuur van een amyloïde fibrillen shows gepresenteerd.
Protocol
Achtergrond: Apertureless probe nabije-veld microscopie IR biedt een hoge ruimtelijke resolutie imaging. Het is een relatief nieuwe techniek waarbij een incident infraroodstraal wordt verspreid door een scherpe atomaire kracht microscopie (AFM) tip oscillerende bij de resonantiefrequentie van de cantilever de buurt van het monster. Een IR-detector verzamelt het verstrooide licht en is gedemoduleerd op deze resonantiefrequentie of de harmonischen. Op deze manier kan de achtergrond spreiding van…
Acknowledgements
Wij dankbaar erkennen NSF, NSERC, NIH, en ONR.
Referencias
- Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy. Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).
- Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600. Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).
- Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes. J. Microsc. 210, 311-314 (2003).
- Kim, Z. H., Leone, S. R. Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy. Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).
- Bridger, P. M., McGill, T. C. Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope. Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).
- Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy. Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).
- Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface. Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).
- Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy. J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).
- Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy. Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).
- Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy. J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).
- Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. . Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).
- Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution. Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).
- Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based (“AFMIR”) acousto-optic technique. Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).
- Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones. J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).
- Meadows, P. Y., Walker, G. C. Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries. Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).
Citar este artículo
Paulite, M., Fakhraai, Z., Akhremitchev, B. B., Mueller, K., Walker, G. C. Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging. J. Vis. Exp. (33), e1581, doi:10.3791/1581 (2009).