Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer ( Agrilus planipennis) Mittels quantitativer Real Time-PCR
Summary
Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) ist ein wirksames Instrument zur mRNA-Spiegel in verschiedenen Insekten-Geweben und Entwicklungsstadien zu diagnostizieren. In diesem Bericht zeigen wir die Verwendung von qRT-PCR, um festzustellen mRNA-Spiegel in verschiedenen Larvenstadien Geweben und Entwicklungsstadien der invasiven Insektenarten, Smaragd Asche borer.
Abstract
Smaragd Asche borer (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>) Ist eine exotische invasive Schädlinge, die Millionen von Eschen getötet hat (<em> Fraxinus</em> Spp) in Nordamerika.<strong></strong> EAB weiterhin rasant verbreitet und Angriffe Eschen unterschiedlichen Alters, von Bäumchen zu Bäumen. Doch bis heute sehr wenig oder gar keine molekulare Wissen existiert für EAB. Wir sind in der Entschlüsselung der molekularen Basis physiologischer Prozesse im Gewebe interessiert, dass die Beihilfen EAB in eine erfolgreiche Kolonisation von Eschen. In diesem Bericht zeigen wir die effektive Nutzung der quantitativen real-time PCR (qRT-PCR) zu prüfen, mRNA-Spiegel in verschiedenen Larvenstadien Gewebe (einschließlich Mitteldarm Fettkörper und Kutikula) und verschiedene Entwicklungsstadien (davon 1<sup> St</sup> -, 2<sup> Nd</sup> -, 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> Th</sup>-Instars, prepupae und Erwachsene) von EAB. Als Beispiel, ein peritrophin Gen (hier benannt,<em> AP-PERI1</em>) Wird als das Gen von Interesse und einem ribosomalen Protein Beispiel (<em> AP-RP1</em>) Als interne Kontrolle. Peritrophins sind wichtige Bestandteile des peritrophic Membran / Matrix (PM), die die Auskleidung der Insektendarm ist. Der PM hat diverse Funktionen wie Verdauung und mechanischen Schutz der Mitteldarm Epithel.
Protocol
Discussion
Der Schwellenwert-Zyklen (Ct)-Wert für jede Probe in der qRT-PCR-Platte erhalten. Zur Herstellung der Standardkurve wurde die Ct-Wert für jede Verdünnung erhalten gegen den log der Konzentration aufgetragen. Die Ct-Werte für die experimentellen Proben wurden dann auf dieser Verdünnungsreihe Standardkurve aufgetragen. Ziel Mengen wurden aus separaten Standard-Kurven für jedes Experiment dh Gewebe-und Entwicklungs-Ausdruck erzeugt werden berechnet. Die relative Expression Werte (Umdrehungen) wurden dann durch Divisi…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir erkennen die Hilfe von Lourdes Delta Arrueta Antequera (Abteilung Entomologie, Ohio State University / OARDC, Wooster, OH) in den Aufbau der Experimente zur Verfügung gestellt. Wir danken Dr. Therese Polen (USDA, Forest Services, NRS) für Sende-EAB Larven Proben. Hilfe zur Verfügung gestellt von Dr. Luis A Canas und Nuris M Acosta mit dem Mikroskop Setup geschätzt wird. Die Finanzierung für dieses Projekt wurde von Staats-und Bundesmittel angeeignet, die Ohio Agricultural Research and Development Center, The Ohio State University zur Verfügung gestellt.
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