Canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de Wharton

Summary

Um protocolo para a canulação do mouse glândula salivar submandibular via ducto de Wharton, é descrito. Para este experimento, a solução de azul de tripano é usado como um tintureiro para demonstrar como esta técnica efetivamente oferece infusões na glândula alvo, e sugerir a confiabilidade dessa nova abordagem como uma potencial terapia medicamentosa / célula clínicos para a regeneração das glândulas salivares.

Abstract

Hipofunção da glândula salivar é grave freqüentemente encontrados em pacientes com síndrome de Sjögren e aqueles que recebem a irradiação terapêutica em sua cabeça e pescoço para tratamento de câncer. Ambos os grupos de sintomas dos pacientes experiência como xerostomia (boca seca), disfagia (deficiente mastigação e deglutição), grave cárie dentária, alteração do paladar, oro-faringe infecções (candidíase), dor, mucosite e desconforto.

Uma abordagem inovadora da medicina regenerativa para o tratamento da glândula salivar hipo-função é especulado no RS Redman, E Mezey et al 2009:. Células-tronco pode ser depositado diretamente pela canulação para a glândula como um método potente em reviver as funções do deficiente órgão. Presumivelmente, a migração de células-tronco estrangeiros irão se diferenciar em células glandulares funcionar como parte da glândula salivar anfitrião. Além disso, esta técnica de canulação é um método de entrega expeditos e eficazes para a aplicação clínica de transferência de genes.

Aqui nós ilustrar as etapas envolvidas na realização do procedimento canulação do mouse glândula salivar submandibular via duto de Wharton (Fig. 1). C3H camundongos (Charles River, Montreal, Quebec, Canadá) são utilizados para este experimento, que foram mantidos sob condições convencionais limpa no centro de recursos McGill University animal. Todos os experimentos foram aprovados pelo comitê de ética da Universidade e estavam de acordo com as diretrizes do Canadian Council on Animal Care.

Para este experimento, uma solução de azul de tripano é infundida a glândula através da abertura do ducto de Wharton, utilizando uma seringa com uma agulha de insulina 29-gauge encerrado dentro de um tubo de polietileno. Posteriormente, o mouse é dissecado para mostrar que as infusões migraram para a glândula com sucesso.

Protocol

1. Descrição processuais Por via subcutânea injetar 1 ml / g de peso corporal de 0,5 monohidratada sulfato mg / ml atropina (Cat # 11330, Fluka, EUA) em cada um mouse para evitar que a secreção salivar de interromper o movimento das infusões. Anestesiar cada rato com um peso corporal mL / g de ketamina a 100 mg / ml e 20 mg / ml solução xilazina (Phoenix Scientific, AR, EUA) injetou intra-peritoneal (IP) Posicione o mouse sobre uma plataforma de plástico …

Discussion

A dificuldade em utilizar este método de canulação é evitar que o refluxo da solução injetada. Mesmo se a solução azul de tripano foi temporariamente migraram para a glândula salivar com sucesso, a secreção de saliva pode interferir com as infusões e causar refluxo da solução de azul de tripano para fora da glândula. Como precaução, além de usar atropina para inibir a secreção de saliva, a cânula de polietileno deve permanecer no duto de Wharton eo pistão da seringa realizada durante 60 segundos ap…

Materials

Name of the reagent	Tipo	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250