脱细胞猪心逆行灌注的程序
Summary
迅速，彻底清除细胞成分通过一个完整的猪心脏逆行灌注的方法。这种方法产生一个站点特定的心脏细胞外基质支架，它有可能用于在多个临床应用。
Abstract
灌注的整体器官脱细胞最近获得了为手段，以创建特定的细胞外基质支架，组织工程领域的兴趣，同时很大程度上保留了原生架构的支架。至目前为止，这种方法已经被使用在各种不同的器官系统，包括心脏，肺，肝1-5。没有一个方便的血管网组织往前脱细胞方法都依赖于长时间暴露的组织的解决方案的清洁剂，酸或酶处理，作为一个装置，以除去细胞和核的组件，从周围的细胞外环境6-8。然而，这些方法的铰链的有效性的解决方案的能力后，通过扩散渗透到组织。相比之下，通过自然器官灌注血管系统有效地减少了扩散距离，便利的交通decellularizati代理商进入组织和细胞成分的组织。在这里，我们描述一个的方法完全decellularize通过一个完整的猪心脏冠状动脉逆行灌注。该协议得到充分脱细胞的心肌细胞外基质（ECM）的支架的三维结构体的心脏完好无损。我们的方法，使用了一系列的耦合与高渗和低渗漂洗，以帮助在裂解和去除细胞的酶，洗涤剂，和酸。所使用的协议胰蛋白酶溶液分离后跟的Triton X-100和脱氧胆酸钠的解决方案，以帮助除去多孔材料中的基质细胞。所描述的协议也使用大于2升/分钟的长时间的灌注速度。高流速，加上与解决方案的变化允许运输的代理到组织没有细胞碎片污染和确保有效地冲洗该组织。从National Instruments，简称NI所描述的方法删除了所有核材料维生素E猪心脏组织，创建特定于站点的心脏ECM支架，可用于各种各样的应用。
Protocol
Representative Results
Discussion
目前的研究描述的一致和有效的方法去细胞的猪的心脏。该协议是一个修改到先前公布的报告，包括更长的曝光时间，流量和压力增加，提供了更多的可重复的结果。由此产生的脱细胞组织满足所有成功的去细胞组织公布的标准。频繁的解决方案进行了修改，以限制重新引入蜂窝材料的组织，每脱细胞处理剂接触到的持续时间减少到最低限度，以减少对ECM的不利影响。的协议的开始阶段期间，灌?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者要感谢布罗根，游客米歇尔·韦弗，和Kristen利珀特。资助这项研究是由美国国立卫生研究院资助R03EB009237，以及美国国立卫生研究院的培训资助T32EB001026-06来自国家生物医学成像和生物工程和T32HL076124-05。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| Trypsin | Gibco | 15090 | |
| EDTA | Fisher | BP120-500 | |
| NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
| 10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
| Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
| Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
| Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
| Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
| 4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |
Referencias
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