In ömrü ölçümü<em> Drosophila melanogaster</em
Summary
Drosophila melanogaster uzun ömürlü düzenleme moleküler temelini keşfetmek için güçlü bir model organizmadır. Bu protokol bir tekrarlanabilir, uzun ömürlü yanı sıra potansiyel tuzaklar nüfus tabanlı ölçme ve bunlardan kaçınmanın yolları üreten katılan adımları görüşecek.
Abstract
Yaşlanma, fiziksel performansa yol açan ve onu muayene edildiği hemen hemen bütün organizmalarda sürekli fizyolojik bozulma sonuçları, hastalık riskinin arttığı bir olgudur. Bireysel yaşlanma genellikle yaştaki bireylerin büyük kohortlarında gözlem ömrü tarafından laboratuvarda ölçülür yaşa bağlı mortalite, bir artış olarak nüfus düzeyinde tezahür. Ölçüde ölçmek için aramaya Deneyler basit modeli organizmalarda genetik veya çevresel manipülasyonlar etkisini ömrü ömrünü uzatmak ve memelilerde yaşla ilişkili hastalığı önlemek için takson genelinde ve ilham verici yeni stratejiler için muhafaza edilmektedir yaşlanma yönlerini anlamak için son derece başarılı olmuş hangi .
Sirke sineği, Drosophila melanogaster, nispeten kısa ömürlü, uygun hayvancılık ve basit genetik nedeniyle yaşlanma mekanizmaları incelemek için cazip bir model organizmadır.Ancak, yaş-spesifik sağkalım ve ölüm gibi yaşlanma demografik önlemler, deneysel tasarım ve ortamda bile küçük varyasyonlar için olağanüstü duyarlıdır ve yaşlanma deneyler süresince sıkı laboratuvar uygulamalarının bakım gereklidir. Birlikte genetik arka plan dikkatli kontrolü uygulamaya ihtiyacı olan bu hususlar, sağlam ölçümler üretmek için gereklidir. Nitekim, maya uzun ömürlü deneyler, solucanlar, sinekler ve çevresel veya genetik eserler 1-4 kadar takip edilmiştir farelerin çıkarım çevreleyen birçok önemli tartışmalar vardır. Bu protokol, biz laboratuvar şişeleri kullanarak Drosophila da uzun ömürlü ölçüm uzun yıllar boyunca optimize edilmiş prosedürleri bir dizi tanımlamak. Biz de bizim laboratuvar tarafından geliştirilen ve indirme (yüklenememektedir dLife yazılımın kullanımı, tarif http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / yazılım). dLife throughput hızlandırır ve anında işleme ve veri toplama basitleştirilmesi ve veri analizi standartlaştırarak, birleşmeyle Optimum deneysel tasarım tarafından iyi uygulamaları teşvik etmektedir. Biz de tasarım, koleksiyon ve ömrü verileri yorumlamada birçok potansiyel tuzaklar tartışacağız, ve biz bu tehlikeleri önlemek için adımları sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada sunulan protokol genetik, farmakolojik ve çevresel müdahalelerin değerlendirilmesi için uyarlanabilir Drosophila yetişkin uzun ömürlü tekrarlanabilir ölçümler üretmek için bir yöntem açıklanır. Protokol Crucial yönleri dikkatle, larval gelişim ortamı kontrol yetişkin stresi en aza indirerek ve deney grupları ve kontrol grubu arasında önyargı minimize içerir. Biz de dLife ömrü deneme yönetimi yazılımı kullanımı sunuyoruz. Sadece her flakon bir barkod veya RFID etiketi tak…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Ellison Tıp Vakfı (SDP, fon tarafından desteklenen http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) ve NIH R01AG030593 (SDP). Bu çalışma P30-AG-013283 (Yaşlanma Ulusal Enstitüsü tarafından finanse Yaşlanma Biyolojisi Mükemmellik Nathan Şok Merkezi Drosophila Yaşlanma Çekirdek (DAC) kaynak kullanm http://www.nih.gov/ ). Yazarlar eleştirel okuma için yararlı tartışmalar ve özellikle Brian Chung Pletcher Laboratuvar teşekkür etmek istiyorum. Biz veri toplama konusunda yardım almak için Nick Asher ve Kathryn Borowicz kabul etmek istiyorum.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
| Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
| Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
| Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
| 6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
| Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
| Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
| BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
| PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
| Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
| Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
| Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
| Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
| Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
| Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |
Referencias
- Toivonen, J. M., et al. No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects. PLoS Genet. 3, e95 (2007).
- Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. Testing an ‘aging gene’ in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background. Aging Cell. 2, 123-130 (2003).
- Burnett, C., et al. Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila. Nature. 477, 482-485 (2011).
- Bokov, A. F., et al. Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging?. PLoS One. 6, e26891 (2011).
- Lewis, E. B. A new standard food medium. Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).
- Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster. Aging Cell. 7, 478-490 (2008).
- Rera, M., et al. Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog. Cell Metab. 14, 623-634 (2011).
- Kaplan, E. L., Meier, P. Nonparametric Estimation from Incomplete Observations. Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).
- Pletcher, S. D. Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes. Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).
- Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. Why do life spans differ? Partitioning mean longevity differences in terms of age-specific mortality parameters. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 55, 381-389 (2000).
- Promislow, , Tatar, , Pletcher, , Carey, Below-threshold mortality: implications for studies in evolution, ecology and demography. Journal of Evolutionary Biology. 12, 314-328 (1999).
- Pletcher, Model fitting and hypothesis testing for age-specific mortality data. Journal of Evolutionary Biology. 12, 430-439 (1999).
- Partridge, L., Gems, D. Benchmarks for ageing studies. Nature. 450, 165-167 (2007).
- Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).
- Ford, D., et al. Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone. Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).
- Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. The role of parental age effects on the evolution of aging. Evolution. 56, 927-935 (2002).
- Smith, E. M., et al. Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns. J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).
- Sorensen, J. G., Loeschcke, V. Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance. J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).
- Bass, T. M., et al. Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).
- Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster. Mechanisms of Ageing and Development. 5, 347-370 (1976).
- Pittendrigh, C. S., Minis, D. H. Circadian systems: longevity as a function of circadian resonance in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1537-1539 (1972).
- Joshi, A., Mueller, L. D. Adult crowding effects on longevity in Drosophila melanogaster: Increase in age-dependent mortality. Current Science. 72, 255-260 (1997).
- Ja, W. W., et al. Prandiology of Drosophila and the CAFE assay. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 8253-8256 (2007).
- Lee, K. P., et al. Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).
- Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).
