Aquí, presentamos un protocolo para la encapsulación de células catabólicas, que consumen lípidos para la producción de calor en el tejido adiposo intraabdominal y aumentan la disipación de energía en ratones obesos.
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Artículo de método
La encapsulación termogénico preadipocitos para el trasplante en los depósitos de tejido adiposo
En este artículo
Resumen
Resumen
Encapsulación de células fue desarrollado para atrapar células viables dentro de las membranas semi-permeables. Las células encapsuladas injertadas pueden intercambiar metabolitos de bajo peso molecular en los tejidos del huésped tratado para lograr la supervivencia a largo plazo. La membrana semipermeable permite injertado células encapsuladas para evitar el rechazo por el sistema inmune. El procedimiento de encapsulación fue diseñado para permitir una liberación controlada de compuestos bioactivos, tales como la insulina, otras hormonas y citoquinas. Aquí se describe un método para la encapsulación de células catabólicas, que consumen lípidos para la producción de calor y disipación de energía (termogénesis) en el tejido adiposo intra-abdominal de los ratones obesos. La encapsulación de células catabólicos termogénicos puede ser potencialmente aplicable a la prevención y el tratamiento de la obesidad y la diabetes tipo 2. Otra aplicación potencial de las células catabólicos puede incluir la desintoxicación de alcoholes u otros metabolitos tóxicos y contaminantes ambientales.
Introducción
El aumento de incidencia de enfermedades crónicas 1 ha estimulado estudios sobre el trasplante de las poblaciones de células terapéuticas 2. Células madre singénicos o alogénicos son los tipos de células más comúnmente usados para estas aplicaciones 2. Sin embargo, estos tratamientos no permiten el control de la diferenciación y la migración de las células madre después de la implantación y no son rentables. El trasplante de células modificadas genéticamente con funciones beneficiosas prevé mejorar el tratamiento de muchas enfermedades. Sin embargo, las modificaciones genéticas de células son reconocidos por el sistema inmune del hu....
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Protocolo
El protocolo de estudio fue aprobado por los Comités de Ética de la Universidad del Estado de Ohio. Los experimentos con animales fueron aprobados por protocolo de IACUC. Todos los procedimientos se realizaron bajo el gabinete de bioseguridad de nivel 2 con flujo laminar. Hemos seguido todos los requisitos y procedimientos de seguridad estándar. La técnica de microencapsulación para la preparación de microcápsulas se ha realizado como se ha descrito 17, 18.
1. Preparación de Materiales
- Preparar 10 ml de solución de alginato de sodio al 2% en solución salina fisiológica en autoclave (0,9% de NaCl en agua). Preparar la....
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Resultados
La Figura 1 muestra que cada paso de la producción de microperlas podría ser controlada bajo el microscopio. La Figura 2A muestra cómo co-cultivo adipocitos con una monocapa de células encapsuladas. La Figura 2B es un ejemplo representativo de un estudio cuantitativo usando adipocitos / microcápsulas co-cultivos que se describe en el capítulo 5. Los lisados de adipocitos se analizaron mediante Western blot. Células encapsuladas no fueron analizados en este experimento.......
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Discusión
Varios métodos han sido utilizados para encapsular células, incluyendo secado, extrusión, y la emulsión 19. En este método, las perlas de alginato se extruyen a través de una aguja, a continuación, recubierto con PLL y el núcleo de alginato se disuelve para completar la encapsulación. Aunque este método se ha utilizado durante años, la formación de las perlas con el tamaño deseado y la forma esférica es todavía difícil. El tamaño de las cápsulas es altamente dependiente de la viscosidad de la solución de algi.......
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Divulgaciones
No se declaran conflictos de intereses.
Agradecimientos
Nos gustaría dar las gracias a Jennifer Petrosino y David DiSilvestro ayuda editorial. Esta investigación fue apoyada por el premio número 20020728 de la American Egg Board y el Premio número 10040042 de Novo Nordisk Farmacia, así como por el Centro de Innovación de Alimentos, Oficina de Asuntos Internacionales, Centro de Investigación Avanzada Alimentos Funcionales y Emprendimiento en OSU, así como la National Science Foundation concede CEE-0914790 (LJL). El proyecto descrito fue apoyada por el premio número R21OD017244 (OZ) y UL1RR025755 (OSUCCC) desde el Centro Nacional de Recursos para la Investigación, financiado por la Oficina del Director de los Institutos Nac....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Dispositivo de encapsulación (VAR V1) | Nisco | LIN-0042 | Ninguno Bomba |
| de jeringa científica KD | KD scientific | 780100Y | Ninguno |
| Microscopio Olympus | Olympus Optical | IX70-S8F2 | Ninguno |
| Alginato de sodio | Sigma | MKBP8122V | Ninguno |
| Hidrobromuro de poli-L-lisina (PLL) | Sigma | 020M5006V | Ninguno |
| Cloruro de calcio | Sigma | SLBJ2662V | Ninguno |
| Citrato de sodio tribásico dihidratado | Sigma | 030M0200 | Ninguno |
| Cloruro de sodio | Sigma | SLBD2595V | Ninguno |
| Mini-PROTEAN TGX Gels | Bio-Rad | 456-1093 | Ninguno |
| Anticuerpo primario ATGL (de conejo) | Señalización celular | 2138S | Ninguno |
| Anticuerpo secundario (anti conejo) | LI-COR | 926-68071 | Ninguno |
| Tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) | Boston BioProducts | D25Y6Z | Ninguno |
| Fosfato tamponado solución salina (PBS) | Sigma | RNBD2893 | Ninguno |
| Tripsina | Gibco | 25200-056 | Ninguno |
| Cortizone 10 ungüento anti-picor | Cortizone 10 | C4029138 | Ninguno |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco | 11965-092 | Ninguno |
| Suero para terneros recién nacidos (CS) | Sigma | N4762 | Ninguno Suero |
| fetal bovino (FBS) | Sigma | F4135 | Ninguna |
| 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) | Sigma | I0516 | Ninguna |
| Dexametasona | Sigma | D4902 | Ninguna |
| Insulina (bovina) | Sigma | I5879 | Ninguna |
| Comprimidos de cóctel de inhibidores de la proteasa | Roche | 4693159001 | Ninguna |
Referencias
- Vogeli, C., et al. Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs. Journal of general internal medicine. 22, Suppl 3. 391-395 (2007).
- Vija, L., et al.
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Reimpresiones y permisos
