סרקומה קפוסי (קאי אס) הוא גידול הנגרמת על ידי זיהום עם oncogenic וירוס ההרפס-8/KS ההרפס האנושי (HHV-8/KSHV). המודל התרבות תאי אנדותל המתואר כאן הוא לצורכיכם לימוד המנגנון שבאמצעותו KSHV המרות התאים המארחים.
סרקומה קפוסי (קאי אס) הוא גידול יוצא דופן המורכבת מתרבים פלך בתאים, הוא שיזם זיהום של תאי אנדותל (EC) עם KSHV, והוא מתפתח לרוב בסביבה של החיסוני. למרות עשורים של מחקר, הטיפול האופטימלי של KS נשאר גרוע מוגדרים, התוצאות הקליניות שלילי במיוחד הגדרות משאב מוגבל. נגעים KS מונעים על ידי אנגיוגנזה פתולוגי, דלקת כרונית, oncogenesis, במבחנה תא תרבות מודלים שונים פותחו כדי לחקור תהליכים אלו. KS נובע תאים הנגועים KSHV ממוצא אנדותל, כך EC-שושלת התאים מספקים המתאים ביותר במבחנה המחליפים למבשר התא כישור. עם זאת, כי EC יש תוחלת חיים מוגבלת במבחנה , כמו המנגנונים oncogenic מועסק על ידי KSHV יעילה פחות מאלה של וירוסים אחרים, tumorigenic, מתקשים להעריך תהליכי טרנספורמציה של ראשי או לכלכלת מונצחים טלומראז לכן, מודל תרבות המבוססת על EC הרומן פותחה שתומך ברצון מטרנספורמציה בעקבות זיהום עם KSHV. חוץ רחמי הביטוי של הגנים E6, E7 מסוג וירוס הפפילומה האנושי 16 מאפשר לתרבות מורחבת של מתאימים לגיל המעבר ואימץ ו- KSHV-נגוע EC ותומך הפיתוח של טרנספורמציה באמת (כלומר tumorigenic) פנוטיפ של תרביות תאים נגועים . מודל זה צייתן ולא מאוד לשחזור של KS הנחתה את הגילוי של כמה חיוני איתות המסלולים עם פוטנציאל גבוה לתרגום לתוך הגדרות קליניים.
סרקומה קפוסי (קאי אס) הוא גידול רב נקודתית angioproliferative להשפיע על עורי, הרירית, אתרי הקרביים שמתפתח הנפוץ ביותר בסביבה של דיכוי המערכת החיסונית מתקדמים1. 4 טפסים אפידמיולוגיים תוארו: קלאסי, טופס indolent בדרך כלל משפיע על אנשים מבוגרים של הים התיכון והמזרח התיכון מורשת; iatrogenic, הנובע טיפול עם תרופות לדיכוי המערכת החיסונית לאחר השתלת איברים; מגיפה, סרטן איידס, הגדרת; מהם ייחודיים, טופס שאינו תלוי-HIV נפוץ אצל ילדים באזורים אנדמיים באפריקה. עם כניסתו של משטרי סמים אנטי-retroviral שילוב יעיל לטיפול ב- HIV, KS מגיפה מאובחנת הרבה פחות נפוץ במדינות מתפתחות. עם זאת, טפסים אנדמיים, מגיפה קלינית אגרסיבי נשארים בין הנפוץ ביותר סרטן שאובחנו רבים במדינות אפריקה2,3,4. לכן, זיהוי של תרופות ממוקדות פתוגנזה יעילות לטיפול KS היא עדיפות למחקר.
בהיסטולוגיה, KS נגעים מאופיינים כורוידאלית הנרחבים אך חריג לפיו פלך בתאים ממוצא EC בצורת רשתות כלי דם רציף5. אלה כלי נורמלי (“חרכי כלי הדם”) לאפשר extravasation של אריתרוציטים, אשר נותנות נגעים הצבע האופייני שלהם. בנוסף, נגעים לכלול לויקוציטים רבות המאפיינות דלקת כרונית (קרי, לימפוציטים מקרופאגים, תאי פלזמה). רגרסיה של נגעים KS ביצוע שיחזור המערכת החיסונית שתיארנו, רומז כי KS יש תכונות של שניהם hyper-ציבוריות ו סרטניים נכון6,7,8,9.
KS ההרפס (KSHV), סוכן סיבתי של KS, זוהתה בשנת 199410. מאז ואז רבים במבחנה תרבית תאים פותחו מודלים כדי לאפשר פתוגנזה מחקרים, כולל תאים explanted מן הגידול ביופסיה חומר ראשוני או לבטא טלומראז EC נגוע KSHV במבחנה11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18. אף אחד הדגמים זמין כעת באופן מלא recapitulates microenvironment הגידול של KS, אבל כולם תרמו ידע בעל ערך להבנתנו pathobiology של KSHV זיהום. שלא כמו אחרים הידועים tumorigenic ההרפס האנושי וירוס אפשטיין בר (EBV), KSHV לא בקלות להפוך תאים בתרבות בעקבות דה נובו זיהום19,20,21, 22. עם זאת, יש כבר להתגבר על מגבלה זו על-ידי transducing הראשית EC אנושי גם מעורב מוצא microvascular או הלימפה E6 ו- E7 גנים של וירוס הפפילומה האנושי 16 לפני זיהום עם KSHV23,24 . הביטוי של אלה oncogenes אקסוגני מגדיל באופן דרמטי את הפוטנציאל להפוך של KSHV במבחנה באופן חלקי על-ידי מתן עוד עיכוב של רטינובלסטומה חלבון ו- p5323,24. שיטה זו של התמרה חושית EC אפשרה מעבדות מרובים כדי לזהות שינויים מרכזיים של המארח ביטוי גנים תא זה הם המושרה על-ידי זיהום KSHV, המופיעים כדי להקל על KS תא הישרדות והתפשטות25,26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32. הפרוטוקולים המפורטים להלן הן פשוטות וברורות מאוד לשחזור, יביא הדור של מתאימים לגיל המעבר EC הנגועים KSHV ופקדים הנגועים ואימץ יכול להיות תרבותי עבור הרבה יותר זמן ראשי תאים והאם לאפשר החקירה של מנגנונים oncogenic מועסק על ידי KSHV. למרות הפרוטוקול כולל שיטה לייצור פראי סוג KSHV מהקו הראשי תפליט לימפומה תא BCBL-1, EC E6/E7-מונצח גם הם רגישים מאוד זיהום עם BACmid רקומביננטי נגזר KSHV-BAC1630. פרוטוקולים עבור הכנת BAC16 מתוארים במקומות אחרים33,34.
Oncogenesis הוא תהליך רב שלבי העוקפות אמצעי חשוב בתוך האורגניזם36. כפי KS נגעים קיימים לאורך קשת של דלקת כרונית כדי סרקומות נכון, הבהרה של תהליכים מסוימים הקשורים pathophysiological מתווכת על-ידי KSHV דורש כי מחקרים להתנהל במודלים התרבות תאים התומכים טרנספורמציה9. יצוין כי אובדן ק?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי K12 HD068322 (SCM); R01 CA179921, P51 OD011092 (AVM); פרס 14PRE20320014 של איגוד הלב אמריקה (SB).
BCBL-1 cells | NIH AIDS Reagent Program | 3233 |
PA317 cells | ATCC | CRL-2203 |
Neonatal dermal microvascular endothelial cells | Lonza | CC-2505 |
EBM-2 Basal Medium | Lonza | CC-3156 |
EGM-2 BulletKit | Lonza | CC-3162 |
anti-KSHV LANA/ORF 73 | Advanced Biotechnologies | 13-210-100 |
TrypLETMExpress, no phenol red | ThermoFisher | 12604013 |
RPMI | ||
DMEM | ||
PBS with calcium and magnesium |