mikrotiter plakaları orta düzensiz kaybı üniforma çok hücreli tümör sfero oluşumu tekrarlanabilirlik etkiler. Kültür şartlarının iyileştirilmesi küremsi oluşumu tekrarlanabilirlik ve sıvı üst tabaka tekniği ile küremsi bazlı deneylerin sonuçları geliştirmek önemli bir orta kaybını azaltmak.
Yakından in vivo koşullarda taklit Tümör modelleri potansiyel anti-kanser ilaçların taranması için ilaç keşfi ve geliştirilmesi giderek daha popüler hale gelmektedir. Çok hücreli tümör sferoidler (MCTSes) etkili bir talebi optimizasyonu ve hedef doğrulama için in vitro bir model bunları uygun hale getirir, katı tümörlerin fizyolojik koşulları taklit eder. MCTS kültürü için çeşitli tekniklerin dışında, agaroz üzerinde sıvı bindirme yöntemi MCTS üretimi için en ucuz yöntemlerden biridir. Bununla birlikte, yüksek verimli tarama için sıvı kaplama kullanarak MCTS kültürleri güvenilir aktarım agaroz ile mikrotiter plakaları (MAS) kaplanması ve kuyu boyunca tek MCTS formasyonunun irreproducibility dahil kısıtlamaları bir dizi tarafından tehlikeye. Milletvekilleri ilaç için tüm plaka kullanımını engelleyen, plaka dış ortamdaki aşırı buharlaşma sonucu etkileri kenar önemli yatkındırtestleri. Bu el yazması üniforma MCTS formasyonu ölçeklenebilirlik ve tekrarlanabilirlik arttırmak için sıvı bindirme tekniği detaylı teknik geliştirmeler sağlar. ilaç tedavisi sunulmuştur sonra Ayrıca, MCTS değerlendirilmesi için basit, yarı otomatik ve evrensel olarak uygulanabilir yazılım aracı ile ilgili detaylar sunuyor.
tümörlerde kanser hücreleri fizyolojik hücre dışı matris ve etkileşim hücreleri ile çevrili bir kompleks 3 boyutlu (3D) bir yapı içerisinde düzenlenir. Yaklaşık dokularda bütün hücreler 3 boyutlu bir ortamda bulunan tümör özellikleri taklit nitro tümör modellerinde daha fazla fizyolojik olarak uygun olan ihtiyaç çok 3D kültür teknikleri, 1, 2, 3 geliştirilmesi ile sonuçlanmıştır. Bu modeller artık 3D 2 terapötik metastazı ve hücre yanıtına tümör mikro rolü çalışmak için temel araştırma araçları haline gelmektedir. Ayrıca, 2-boyutlu (2B) hücre kültürleri 4 ile karşılaştırıldığında, 3 boyutlu modeller hücre içi sinyal yollar etkileyen tümör stromanın etkileşimleri, daha iyi anlaşılması için izin verir.
kanser hücre hatlarının çok hücreli tümör sferoidler (MCTSes) sık sık 3D cep c kullanılanin vivo tümörlerin göreli yakınlığı nedeniyle ulture modelleri. Kullanılan çeşitli teknikler dışında, agaroz ile kaplanmış plakalar MCTS nesil sıvı katlamalı tekniği (lot) talebi optimizasyonu ve hedef doğrulama 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 için büyük ilgi görmüştür. Bu LOT 6, 7 kullanılarak MCTS kültürlerde bileşik kütüphaneler pilot ekranları çalıştırmak için başarılı başardık son çalışmalar bellidir. Ancak, orta buharlaşma kaynaklı düzensiz kaybına MCTS morfolojisi ve büyüme iyi-to-kuyu değişkenlik mikrotitre levhaları kullanılarak LOT (milletvekilleri) eşlik ortak engelli bulunmaktadır. Sonuç olarak, üniform olmayan MCTSes oluşumu önemini ve alaka ödünFarmakolojik Testler 8, 12, 13 veri. birimleri dağıtma otomatik sıvı kullanırken uyarlık konularına ek olarak, LOT-tabanlı yüksek verimli deneyleri etkileyen başka pratik bir sorun milletvekilleri kaplama agaroz ile. Besleme ünitesi agaroz jelleşmenin önlenmesi için ısıtıldı tutulabilir, ancak tevzi kaset ve boru tıkanma robotik sistemler 6 için potansiyel bir husustur.
Bu zorlukların bazılarının üstesinden gelmek için, biz son zamanlarda MCTS kültürü 8 LOT birkaç değişiklik geliştirmişlerdir. Bu modifikasyonlar özellikle yaygın yüksek verimli tarama laboratuvarlarında bulunan araçları kullanarak milletvekilleri gelen düzensiz orta kaybını önlemek için olası yolları dayanmaktadır. 3 arasında muntazam boyutlu ve tekrarlanabilir MCTSes üretilmesi için modifiye edilmiş çok bir ayrıntılı işlem84-kuyu plakaları (İP) sunulmuştur. Eser özellikle, enine kesit alanının ölçümü için net bir şekilde tanımlanmış bir sınır yoktur, kısmen parçalanmış, ilaçla işleme tabi tutulmuş MCTSes olarak, MCTS boyutunun değerlendirilmesi için bir yarı-otomatik rutin sunulur.
Filtreli Agaroz ile 384 Kuyu TC Plakaları Kaplama
LOT standart bir uygulama kaplamak için agaroz ve / veya dağıtma birimi gerekir plakaları, agaroz 6 jelleşmenin önlenmesi için ısıtıldı tutulması için% 1-1.5, düşük-erime noktalı agarozda kullanmaktır. çapı 0.2 ila 0.4 mm arasında değişen küçük bir boru delikler sıvı dağıtma kasetleri kullanılarak birden fazla tabak hazırlarken agaroz jel potansiyel bir sorun değildir. Bu dağıtma sıras…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Eğitim, Gençlik ve Spor (LO1304) Çek Bakanlığı ve Çek Cumhuriyeti Teknolojik Ajansı (TE01020028) hibe tarafından desteklenmiştir. Yazarlar çevresel kapak fotoğraf çekerken Dr. Lakshman Varanasi teşekkür etmek istiyorum.
Agarose | Sigma-Aldrich | A9414 | Low-melting |
McCOY's 5A Medium | Sigma-Aldrich | M8403 | |
“rapid” Filtermax filter | TPP | 99505 | 0.22 μm, 500 mL |
Multidrop™ Combi Reagent Dispenser | Thermo Fisher Scientific | 5840300 | |
Small Tube Dispensing cassette | Thermo Fisher Scientific | 24073295 | Metal tip |
384-well TC plate | PerkinElmer | 6057308 | Plate type- CellCarrier |
Standard Tube Dispensing Cassette | Thermo Fisher Scientific | 24072670 | |
MicroClime Environmental Lid | Labcyte | LLS-0310 | |
DMSO | Sigma | D4540 | |
Rotary Incubator (SteriStore ) | HighRes Biosolutions | 23641 | Serial No.: D00384 |
Microplate Washer Dispenser | BioTek | Unspecified | Model: EL406 |
High-Content Imaging System (CellVoyager ) | Yokogawa Electric Corporation | Unspecified | Model: CV7000 |
Orange G | New England Biolabs | B7022S | |
TrypLE™ Express recombinant cell dissociation reagent | Thermo Fisher Scientific | 12604021 | Phenol red free |