בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה
Summary
מאמר זה מייצג שימושי בתוך מבחנה כדי להעריך את היכולת של המדיום הממוזג מתאי הגידול כדי למשוך מקרופאגים.
Abstract
מקרופאגים הקשורים לגידול (TAMs) חשבון עבור אחוז גדול של תאים במסת הגידול עבור סוגים שונים של סרטן. Gliנובלסטומה (GBM), גידול ממאיר במוח ללא תרופה, יש עד מחצית ממסת הגידול TAMs. TAMs יכול להיות pro-tumoral וסרי או אנטי-מוסרי, בהתאם להפעלת גנים ספציפיים בתאים. מוטציות גנטיות בגידולים, באמצעות ויסות ציטוקין ביטוי, יכול להשפיע על גיוס של TAMs לסביבת מיקרו הגידול. כאן, אנו מתארים שיטת כמותית מבוססת התא כדי להעריך את הגיוס מקרופאג על ידי המדיום הממוזג מתאי הגידול. שיטת הפעולה הזאת משתמשת בקו מקרופאג cell האנושי MV-4-11 כדי לחקור את האטרקציה מקרופאג על ידי המדיום הממוזג מ glioblastoma, ומאפשר השתנות גבוהה ושינויים נמוכים. נתונים שנוצרו באמצעות שיטת העבודה הזאת יכולים לתרום להבנה טובה יותר של האינטראקציה בין הגידול לבין מיקרואקולוגיה של הגידול. שיטת דומה יכולה לשמש להערכת האינטראקציה בין תאי הגידול לבין תאים חיסוניים אחרים, כולל תאי T והרוצח הטבעי (NK) תאים.
Introduction
המקרופאגים הם התאים החיסוניים עם פנוטיic גבוהה ופונקציונלי טרוגניות1. הם משחקים תפקידים חשובים במערכות ההגנה של המארחים, תיקון רקמות, פיתוח והתקדמות הגידול1. TAMs הם מקרופאגים ב מיקרואקולוגיה של גידולים מוצקים. Tams מסוימים יכולים לקדם את צמיחת הגידול באמצעות מעכב T בתיווך התא מתווכת פעילות, מודוללדירוג מיקרוסביבה הגידול (tams), קידום אנגיוגנזה, פלישה גרורות2,3,4, 5. tams הם בין סוגי התאים הנפוצים ביותר ב tams ומספר גבוה יותר של tams בדרך כלל הקשורים הישרדות החולה גרוע יותר בסוגים רבים של גידולים מוצקים6. חתימות גנטיות נפרדות של תאי הגידול משפיעים על יכולתם לגייס מקרופאגים. ב-GBM, גידול אגרסיבי במוח עם תרופה לא, מקרופאגים יכולים לייצג עד חצי של מסת הגידול7. שיתוף הגברה של קולטן הגידול באפידרמיס (Egfr) ואת המוטציה שלה egfrviii היא נצפתה לעתים קרובות ב-GBM, אשר מקנה יתרונות גידול הגידול8. תאים שיתוף הביטוי EGFR ו EGFRvIII למשוך מקרופאגים יותר לעומת תאים ביטוי EGFR או EGFRvIII ביחידים7.
נוגדנים הם משפחה של ציטוקינים קטנים לשחק תפקידים משמעותיים בוויסות הרכב החיסונית ב tme6,9. תאים אנושיים לבטא יותר מ 50 ציטוקינים10. חדירת החיסון בגידולים ממומשת במידה רבה על ידי האינטראקציה בין ציטוקינים וקולטני ציטוקינים11. כל סוג של תאים חיסוניים מבטא קולטנים כימוקין ברורים/נוגדנים והוא יכול להיות מגויס על ידי תאים הפרשת נוגדנים/כימוקין קולטנים ספציפיים12. תאים סרטניים יכולים להגביר את הביטוי של נוגדנים מסוימים כדי לגייס תאים חיסוניים כגון TAMs, הרגולציה תאים T ותאי מדכא מיאלואיד נגזר (MDSCs)6. המצור על כימוקין ספציפיים מופרש על ידי גידולים יכולים להיות דרך מבטיחה חדירה מעכבים של תאים חיסוניים לתוך מסת הגידול.
כאן, אנו מתארים פרוטוקול המאפשר הערכה מתורבת של האינטראקציה מקרופאג הגידול, באמצעות מדיה ממוזג מתאי הגידול המכילים נוגדנים ו מקרופאג קווי תאים.
Protocol
Representative Results
Discussion
בפרוטוקול זה, קיימים מספר שלבים מרכזיים: 1) הבחירה של הכנסת הטרנסטוב. עבור הקו הנייד MV-4-11, 5 יקרומטר טרנסטוב מוסיף עבודה היטב. עם זאת, עבור קווי תאים אחרים כגון קו מונוציט בשימוש נפוץ THP-1, גודל נקבובית שונה עשוי לעבוד טוב יותר. 2) כאשר קווי תאים שונים גדלים במהירויות שונות, חשוב לכוונן את עוצמת ה…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
גרנט תמיכה: Z התקבלה תמיכה מתוך הקרן לימונדה של אלכס לעמוד, האגודה האמריקנית לגידול במוח, NIH T32CA108462 ותוכנית למחקר ביורפואי פריצת דרך, אשר ממומנת חלקית על ידי קרן סנדלר. וייס נתמך על ידי מענקי NIH R01CA221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103; הקרן לחקר הסרטן ע שמואל וקסמן; והיו ר אוולין ומאטי אנדרסון
Materials
| 0.1 μm filtration cup | Thermo fisher | 566-0010 | |
| 0.45 μm filter unit | Millipore | SLHA033SS | |
| 10 mL serological pipettes | Olympus plastics | 12-104 | |
| 15mL sterile centrifuge tubes | Olympus plastics | 28-103 | |
| 1 mL pipette tip | ART molecular bioproducts | 2779-RI | |
| 2 mL aspirating pipet | Falcon | 357558 | |
| 24-well plate | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 4x lysis buffer | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 5 μm Transwell insert | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| 75cm2 flask | Corning | 430641U | |
| Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
| B27 | Gibco | 12587-010 | |
| CyQuant Dye | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| DMEM:F12 | Gibco | 10565-018 | |
| EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| FBS | Gibco | 26140 | |
| FGF | Peprotech | 100-18B | |
| IMDM | Gibco | 12440-053 | |
| PBS | Gibco | 14190-144 | |
| Pen Strep | Gibco | 15140-122 | |
| Trypan blue | Biorad | 1450021 |
Referencias
- Liu, Y., Cao, X. The origin and function of tumor-associated macrophages. Cellular & Molecular Immunology. 12 (1), 1-4 (2015).
- Riabov, V., et al. Role of tumor associated macrophages in tumor angiogenesis and lymphangiogenesis. Frontiers in Physiology. 5, (2014).
- Coussens, L. M., Zitvogel, L., Palucka, A. K. Neutralizing tumor-promoting chronic inflammation: a magic bullet. Science. 339 (6117), 286-291 (2013).
- Tsukamoto, H., et al. Combined Blockade of IL6 and PD-1/PD-L1 Signaling Abrogates Mutual Regulation of Their Immunosuppressive Effects in the Tumor Microenvironment. Investigación sobre el cáncer. 78 (17), 5011-5022 (2018).
- Borgoni, S., et al. Depletion of tumor-associated macrophages switches the epigenetic profile of pancreatic cancer infiltrating T cells and restores their anti-tumor phenotype. Oncoimmunology. 7 (2), e1393596 (2018).
- Argyle, D., Kitamura, T. Targeting Macrophage-Recruiting Chemokines as a Novel Therapeutic Strategy to Prevent the Progression of Solid Tumors. Frontiers in Immunology. 9, 2629 (2018).
- An, Z., et al. EGFR cooperates with EGFRvIII to recruit macrophages in glioblastoma. Investigación sobre el cáncer. , (2018).
- Fan, Q. W., et al. EGFR phosphorylates tumor-derived EGFRvIII driving STAT3/5 and progression in glioblastoma. Cancer Cell. 24 (4), 438-449 (2013).
- Jacquelot, N., Duong, C. P. M., Belz, G. T., Zitvogel, L. Targeting Chemokines and Chemokine Receptors in Melanoma and Other Cancers. Frontiers in Immunology. 9, 2480 (2018).
- Arimont, M., et al. Structural Analysis of Chemokine Receptor-Ligand Interactions. Journal of Medicinal Chemistry. 60 (12), 4735-4779 (2017).
- Turner, M. D., Nedjai, B., Hurst, T., Pennington, D. J. Cytokines and chemokines: At the crossroads of cell signalling and inflammatory disease. Biochimica et Biophysica Acta. 1843 (11), 2563-2582 (2014).
- Sokol, C. L., Luster, A. D. The chemokine system in innate immunity. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (5), (2015).
- Pathria, P., Louis, T. L., Varner, J. A. Targeting Tumor-Associated Macrophages in Cancer. Trends in Immunology. 40 (4), 310-327 (2019).
- Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (7), 399-416 (2017).
