筋原培養組織コンストラクトの作製
Summary
ここで、我々は、骨格筋芽細胞を含むコラーゲンベースの、組織構造の作製を実証する。これらの3次元設計された構造は、組織を交換または修復するために使用されることがあります<em> in vivoで</em>。我々の目的のために、我々は、完全心ブロックの修復のための房室の電気コンジットとしてこれらを設計している<sup> [1]</sup>。
Abstract
電子ペースメーカーは、医療機器を救命しているという事実にもかかわらず、小児患者における長期的なパフォーマンスは、子供の小さいサイズと彼らの必然的な成長により課される制限には問題によりすることができます。その結果、心臓のリズム障害を有する小児患者のために特別に設計された革新的な治療のための真の必要性がある。我々は提案することを含むコラーゲンベースのマトリックスで構成される導電性の生物学的代替細胞が良く、成長に適応再発手術の必要性を削減し、大幅にこれらの患者の生活の質を向上させることができるautologously由来。本研究では、我々は、ファッションにハイドロゲルマトリックス内に心臓の上部および下部チャンバーの間の電気コンジットとして動作する外科的に移植可能な組織構造を主骨格筋芽細胞の細胞培養を組み込むための手順を説明します。最終的に、我々は、完全心ブロック児の房室の電気伝導を復元するために設計された組織のこのタイプを使用して期待しています。そのビューでは、我々は、確立されたプロトコルの修正バージョンを使用して、ラミニンコートした組織培養皿の上に新生児のLewisラットやプレート、それらの骨格筋から筋芽細胞を分離<sup> [2、3]</sup>。 1〜2日後、培養細胞は、抗生物質で1型コラーゲン、マトリゲル™、およびNaHCOを収集し、混合され<sub> 3</sub>。その結果、ほぼ任意の形状と大きさの金型にキャストすることができる粘性、均一な溶液です。<sup> [1、4、5]</sup>。私たちの組織構造の場合、我々は標準的な手順を用いてヒツジ胎仔の皮膚から単離された1型コラーゲンを採用<sup> [6]</sup>。いったん組織は37強化しています°コンストラクトが水没するまでC、文化メディアは慎重にプレートに追加されます。設計組織は、それがために準備が整った時点で、さらに2日間の脱水によってさらに凝縮して許可されています<em> in vitroで</em>評価または外科的移植。
Protocol
Discussion
組織の構造がキャストされるの金型は、任意の形状と大きさで行うことができますが、添付ファイルの少なくとも2点がなければなりません。そうでなければ、マトリックスと細胞は球状構造を形成し、細胞が死ぬ。現在のプロトコルでは、我々はこの目的のためにポリエステルメッシュを使用することを記載し、まだ我々はまた、正常にステンレスメッシュを使用している。明らかに、より…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
、スラッシャーの研究基金からの新しい研究賞、ボストン小児病院で心臓伝導基金への拠出、この作品は、国立衛生研究所から研究助成金（HL088206 HL068915）によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
