تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات
Summary
يوصف بروتوكول قصيرة لتلطيخ البروتين مع Coomassie بريليانت الأزرق (المصرف المركزي) G – 250 في المواد الهلامية بولي أكريلاميد دون استخدام مذيبات عضوية أو حمض الخليك في الإجراءات تلطيخ الكلاسيكية مع المصرف المركزي.
Abstract
الكلاسيكية في تلطيخ البروتين باستخدام بروتوكولات Coomassie بريليانت الأزرق (المصرف المركزي) ، وحلول مع محتويات عالية من المذيبات العضوية السامة والقابلة للاشتعال (الميثانول والايثانول أو 2 بروبانول) وحامض الخليك يتم استخدامها من أجل التثبيت ، وتلطيخ destaining من البروتينات في هلام بعد SDS صفحة. لتسريع الإجراء ، والتدفئة الحل تلطيخ في المايكرويف لفترة قصيرة وتستخدم بشكل متكرر. هذه النتائج عادة في تبخر الميثانول السامة أو الخطرة ، والإيثانول أو 2 بروبانول ورائحة قوية من حمض الخليك في المختبر والتي ينبغي تجنبها لاعتبارات السلامة. في بروتوكول نشر أصلا في طلبات براءات الاختراع اثنين من Wondrak EM (US2001046709 (A1) ، US6319720 (B1)) ، يوصف تركيبة بديل من الحل تلطيخ الذي يستخدم في أي مذيب عضوي أو حامض. يذوب في الماء المصرف المركزي bidistilled (60 – 80mg من المصرف المركزي ليتر لكل G – 250) ويضاف حمض الهيدروكلوريك 35 مم والمجمع الوحيد الآخر في حل تلطيخ. تتم staning المصرف المركزي من هلام بعد الغسيل SDS – PAGE وشامل من هلام في الماء bidistilled. عن طريق تسخين هلام أثناء الغسيل وتلطيخ الخطوات ، يمكن الانتهاء من عملية أسرع وليس compunds السامة أو الخطرة يتم تبخير. لتلطيخ من البروتينات يحدث بالفعل في حدود 1 بعد دقيقة والتدفئة الجل في تلطيخ الحل ويتم تطويره بالكامل بعد 15-30 دقيقة مع خلفية زرقاء قليلا أن destained تماما عن طريق الغسيل لمدة طويلة الجل الملون في الماء bidistilled ، دون أن يؤثر هذا البروتين الملون العصابات.
Protocol
Discussion
- خطوات غسل حاسمة لتلطيخ كفاءة من البروتينات. ويمكن لتقليل الوقت غسل أقل من 2 دقيقة أو انخفاض حجم المياه (<50ml) ينتج بروتين نطاقات شاحبة اللون الأزرق ، وعلى الأرجح بسبب ارتفاع كميات SDS المتبقية في هلام.
- إذا البروتينات ستكون تحليله…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نعترف المساعدة التقنية من Racké إيناس.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | any other CBB G-250 could be used as well | |
| Concentrated HCl |
References
- Wondrak, E. M. Process for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
- Wondrak, E. M. Solution for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
