Organik Solvent ve Asetik Asit olmadan Jeller Coomassie G-250 ile Proteinlerin Boyama

Summary

Coomassie Brillant Blue (CBB) poliakrilamid jeller G-250 ile protein boyanması için kısa bir protokol CBB ile klasik boyama işlemleri gibi organik çözücüler veya asetik asit kullanmadan açıklanmıştır.

Abstract

Coomassie Brillant Blue (CBB), toksik ve yanıcı organik çözücüler (Metanol, Etanol ve 2-propanol) ve asetik asit içeriği ile çözümler kullanarak klasik protein boyama protokolleri, fiksasyon için kullanılan boyama ve SDS sonra bir jel proteinlerin destaining -PAGE. Kısa bir süre mikrodalga fırında ısıtma, boyama çözüm prosedürü hızlandırmak için sık sık kullanılır. Bu genellikle toksik veya tehlikeli Metanol, Etanol ve 2-Propanol ve güvenliği ile ilgili hususlar nedeniyle kaçınılmalıdır laboratuar asetik asit güçlü bir koku buharlaşması sonuçlanır. EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)) tarafından iki patent başvurularının yayınlanan bir protokol, boyama çözüm alternatif bir kompozisyon solvent organik veya asit olduğu açıklanmıştır. CBB bidistile su içinde çözünmüş (CBB G-250 litre başına 60-80mg) ve 35 mM HCl boyama çözüm sadece bileşik olarak eklenir. Jel CBB staning bidistile su jel SDS-PAGE ve kapsamlı yıkandıktan sonra yapılır. Yıkama sırasında jel ısıtma ve adımları boyama, sürecin daha hızlı bitmiş olması ve herhangi bir toksik veya zararlı bileşiklerin buharlaşan. Proteinlerin boyama boyama çözüm jel ısıttıktan sonra 1 dakika içinde zaten ortaya çıkar ve tamamen lekeli protein etkilemeden, bidistile su ile boyanan jel uzun süreli yıkama tamamen destained bir hafif mavi arka plan ile 15-30 dakika sonra geliştirilen bantlar.

Protocol

Bölüm 1: CBB boyama çözüm Hazırlık 60-80 mg CBB, G-250, 2-4 saat süreyle karıştırılarak 1 litre bidistile su içerisinde çözülür. Son olarak, bir dakika karıştırarak 3 ml konsantre HCl ile koyu mavi bir çözüm eklenir ve karanlıkta daha sonra kullanılmak üzere depolanır. Çözüm boyama verimliliği kaybetmeden birkaç ay hafta kadar saklanabilir. Konsantre HCl olağan bakım ve davlumbaz altında ele alınmalıdır. Nihai çözüm pH yaklaşık 2 eldiven kullanılmalıdır …

Discussion

• Çamaşır adımlar proteinleri etkili bir şekilde boyanması için kritik. 2 dakika veya hacim azalması (<50 ml) su altında bir azalma yıkama süresi, yüksek miktarda jel artık SDS nedeniyle büyük olasılıkla soluk mavi protein bantları, neden olabilir.
• Proteinler, kütle spektrometresi ile analiz olacak ise, mikrodalga fırında ısıtma adımları atlanabilir, her adımda yaklaşık 10 dk ve grubun yoğunluğu kadar uzatıldı boyama süresi uzatıldı jel yıkama için yeterince güçlü . Kütle spektrometre…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Coomassie Brilliant Blue G-250		AppliChem	A3480	any other CBB G-250 could be used as well
Concentrated HCl