クーマシー有機溶媒および酢酸のないG - 250でゲル中のタンパク質の染色
Summary
クマシーブリリアントブルー（CBB）ポリアクリルアミドゲル中でのG – 250によるタンパク質染色用の短いプロトコルは、CBBと古典的な染色の手順のように有機溶剤または酢酸を使用せずに記述されています。
Abstract
クマシーブリリアントブルー（CBB）、有毒で引火性の有機溶媒（メタノール、エタノールまたは2 – プロパノール）と酢酸の高い内容を持つソリューションを使用して古典的なタンパク質染色のプロトコールで染色し、SDS泳動後のゲル中のタンパク質の脱色、固定のために使用されています- PAGE。頻繁に使用されている短い時間のために電子レンジでの染色溶液を加熱し、手続きのスピードアップに。有毒または有害なメタノール、エタノールまたは2 – プロパノール及び安全性の考慮のために避けるべきラボにおける酢酸の強いにおいの蒸発でこれは通常、結果。もともとEM Wondrak（US2001046709（A1）、US6319720（B1））によって2つの特許出願で公開プロトコルでは、染色液の代替物はないの有機溶媒や酸が使用されていないで説明されています。 CBBは、蒸留水に溶解している（CBB G – 250リットル当たり60 – 80mg）、35 mMの塩酸は、染色液中の唯一の他の化合物として追加されます。ゲルのCBBのstaningは、蒸留水でゲルのSDS – PAGEと徹底した洗浄の後に行われます。洗浄および染色工程中にゲルを加熱することにより、プロセスをより速く仕上げることができるとは有毒または有害なcompundsは蒸発されていません。タンパク質の染色は、溶液を染色でゲルを加熱した後、1分以内にすでに発生し、完全に染色されたタンパク質に影響を与えずに、蒸留水で染色したゲルの長期にわたる洗浄によって完全に脱色され若干青色の背景色の15-30分後に開発されていますバンド。
Protocol
Discussion
- 洗浄ステップは、タンパク質の効率的な染色のために重要です。 2分または水（<50ミリリットル）の削減量以下に削減、洗浄時間は、ゲル中の残留SDSの高い金額に起因する可能性が最も高い淡いブルーのタンパク質のバンド、になる可能性があります。
- タンパク質は、質量分析によって分析することを予定している場合のバンドの強度が十分な強さになるまで、電子レンジで加熱ステップは、?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、イネスRackéの技術支援に感謝したい。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | any other CBB G-250 could be used as well | |
| Concentrated HCl |
References
- Wondrak, E. M. Process for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
- Wondrak, E. M. Solution for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
