유기 용매 및 초산없이 쿠매시 G - 250로 젤의 단백질 염색법
Summary
쿠매시 블리언트 블루 (CBB)의 polyacrylamide 젤의 G – 250로 단백질 얼룩에 대한 짧은 프로토콜은 CBB와 고전적인 얼룩 절차에서와 같이 유기 용제 또는 초산을 사용하지 않고도 설명되어 있습니다.
Abstract
쿠매시 블리언트 블루 (CBB), 독성 및 인화성 유기 용제 (메탄올, 에탄올 또는 2 – 프로파놀)과 초산 높은 내용으로 솔루션을 사용하는 고전적인 단백질 얼룩 프로토콜에 얼룩 및 SDS 후 젤의 단백질 destaining, 고정에 사용됩니다 페이지. 짧은 시간 동안 전자렌지에 얼룩 솔루션을 가열, 절차를 속도를하는 것은 자주 사용됩니다. 독성 또는 유해 메탄올, 에탄올 또는 2 – 프로파놀 안전 고려 사항으로 인해 피해야한다 실험실에서 초산의 강한 냄새의 증발이 일반적으로 발생합니다. 원래 EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1))하여 두 특허 출원에 발표된 프로토콜에서 얼룩 솔루션의 대체 성분이 더 용매 유기 또는 산성이 사용되지하는에 설명되어 있습니다. CBB는 bidistilled 물속에 녹아있는 것입니다 (CBB G – 250 당 리터의 60 80mg) 35 MM HCL은 얼룩 솔루션에서 유일하게 다른 화합물로 추가됩니다. 젤의 CBB의 staning는 bidistilled 물에 젤의 SDS – PAGE와 철저한 세척 후에 이루어집니다. 세탁 중에 젤 가열 및 단계를 얼룩으로, 프로세스는 빨리 완료 될 수 있으며, 아무런 독성 또는 유해 compunds이 증발되지 않습니다. 단백질 얼룩이 솔루션을 얼룩에 젤 가열 후 일분 이내에 이미 발생하고 완전히 스테인드 단백질에 영향을주지 않고, bidistilled 물속에 스테인드 젤의 장기간 세척하여 완전히 destained하는 약간 파란색 배경과 15-30 분 후에 개발 밴드.
Protocol
Discussion
- 세척 단계는 단백질의 효율적인 얼룩을 위해 중요하다. 2 분 또는 물 (<50ml)의 감소 볼륨 아래의 감소 세척 시간은 겔에 잔류 SDS 높은 금액으로 인한 가능성이 가장 높은 하늘색 단백질 밴드에 발생할 수 있습니다.
- 단백질은 질량 분광법으로 분석 될 경우, 전자 레인지에서 가열 단계는 생략한다, 10의 각 단계에서 분 및 밴드 강도까지 연장 얼룩 시간까지 확장 젤의 세탁 시간은 충분히 강하 . 질량 분?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 이네스 Racké의 기술 지원을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | any other CBB G-250 could be used as well | |
| Concentrated HCl |
References
- Wondrak, E. M. Process for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
- Wondrak, E. M. Solution for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
