Questo articolo illustra la floreali-dip metodo di<em> Agrobacterium tumefaciens</em>-Mediata trasformazione del<em> Arabidopsis thaliana</em>. Con l'introduzione di un ciclo cellulare regolata promotore-reporter,<em> PTSO2:: β-glucuronidasi (GUS)</em>, In<em> Arabidopsis</em>, Ci illustra come si rileva giornalista espressione GUS in piantine transgeniche.
Abstract
La possibilità di introdurre geni estranei in un organismo è il fondamento della biologia moderna e le biotecnologie. Nella pianta fiorita modello<em> Arabidopsis thaliana</em>, I fiori-dip trasformazione del metodo<sup> 1-2</sup> Ha sostituito tutti i metodi precedenti per la sua semplicità, efficienza e basso costo. In particolare, i germogli di fioritura giovani<em> Arabidopsis</emPiante> sono immersi in una soluzione di<em> Agrobacterium tumefaciens</em> Trasporto specifico costruisce plasmide. Dopo l'immersione, le piante vengono restituiti alla crescita normale e semi di resa, una piccola percentuale dei quali sono trasformate con il gene estraneo e possono essere selezionati per il supporto contenente antibiotici. Questo floreali-dip metodo significativamente facilitato<em> Arabidopsis</emDi ricerca> e ha contribuito notevolmente alla comprensione della funzione dell'impianto gene. In questo studio, si usa il floreali-dip metodo per trasformare un gene reporter,<em> Β-glucuronidasi (GUS)</em>, Sotto il controllo di<em> TSO2</em> Promotore.<em> TSO2</em>, Che codifica per la ribonucleotide reduttasi (RNR) subunità piccola<sup> 3</sup>, È un gene del ciclo cellulare regolata essenziale per la biosintesi dNDP nella fase S del ciclo cellulare. Esame della<em> GUS</emEspressione> in transgenico<em> Arabidopsis</em> Piantine mostra che<em> TSO2</em> È espressa in modo attivo divisione tessuti. Il metodo riportato sperimentale e materiali può essere facilmente adattato non solo per la ricerca ma anche di istruzione alle scuole superiori e livelli di college.
Protocol
I. floreale-dip trasformazione di Arabidopsis thaliana Circa 1 mese prima trasformazione, seminare i semi di Arabidopsis sul 4-8 pentole (5 vasi pollice quadrato), con circa 10-15 piante per vaso. Per gli impianti con la fertilità normale, 4 vasi di piante per costruire plasmide sarà sufficiente. Se uno ha a trasformare Arabidopsis mutante con riduzione della fertilità, aumentare il numero di vasi di conseguenza. Le piante sono coltivate in condizioni standard (16 ore d…
Discussion
L'efficienza di trasformazione è determinato da molti fattori diversi, che sono discussi di seguito:
La salute delle piante e la loro età sono di primaria importanza. Circa un mese impianti di produzione di numerose gemme floreali immaturi sono l'ideale. Taglio fuori spara primario di incoraggiare secondaria giornate di formazione sparare 3-4 prima della trasformazione aumenterà l'efficienza della trasformazione. Vecchi impianti darà origine a trasformanti ma ad un tasso inferiore.
…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo Chunxin Wang per la costruzione di pTSO2:: GUS e per le foto in figura 1, Detlef Weigel per la condivisione del GUS-infallibile protocollo, Paja Sijacic, e Courtney Hollender per gli utili commenti. La ricerca in laboratorio, Z. L s è supportato dal US National Science Foundation (IOB0616096 e MCB0744752). ZL è parzialmente supportata dalla University of Maryland Stazione esperimento agricola.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
6-benzyladenine
Sigma
852430
Silwet-77
Crompton Corp.
Toxic, wear gloves
Murashige and Skoog Basal medium (MS)
Sigma
M5519
Gamborg’s vitamin solution 1000X
Sigma
G1019
X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt