의 꽃 - 물놀이 변환 Arabidopsis thaliana 검사 pTSO2 : β - glucuronidase 리포터 유전자 발현
Summary
이 문서의 꽃 – 수영 방법을 보여줍니다<em> Agrobacterium tumefaciens</em의> – 중재 변환<em> Arabidopsis thaliana</em>. 세포주기 조절 발기인 – 기자를 소개함으로써,<em> pTSO2 : β – glucuronidase (거스)</em>로<em> Arabidopsis</em> 우리는 하나가 유전자 변형 모종의 거스 기자 표현식을 감지하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
유기체로 외국 유전자를 도입하는 능력은 현대 생물학과 생명 공학에 대한 기초입니다. 모델 꽃 공장에서<em> Arabidopsis thaliana</em> 꽃 – 딥 변환 방법<sup> 1-2</sup> 때문에 간단, 효율성 및 저렴한 비용의 이전의 모든 방법을 대체하고 있습니다. 젊은 꽃의 특히, 골인<em> Arabidopsis</em> 식물의 솔루션에 담근 아르<em> Agrobacterium tumefaciens</em> 구체적인 플라스미드 구조를 들고. 마른 후, 식물이 정상적인 성장과 항복 씨앗, 외국 유전자로 변환하고 항생제를 포함하는 매체에 대해 선택할 수있는 작은 비율로 반환됩니다. 크게 촉진이 꽃 – 물놀이 방법<em> Arabidopsis</em> 연구와 식물 유전자 기능에 대한 우리의 이해에 크게 공헌했습니다. 본 연구에서는, 우리는 기자의 유전자를 변형하는 꽃 – 수영 방법을 사용<em> β – glucuronidase (거스)</em>의 통제하에<em> TSO2</em> 발기인.<em> TSO2</em> Ribonucleotide 환원 효소 (RNR) 작은 subunit에 대한 코딩<sup> 3</sup> 세포주기의 S – 단계에서 dNDP 생합성에 필수적인 세포주기 규제 유전자입니다. 심사<em> 거스</em유전자 변형>의 표현<em> Arabidopsis</em> 모종가를 보여줍니다<em> TSO2</em>를 적극적으로 조직을 나누어 표현입니다. 보고된 실험 방법 및 자료를 쉽게 고등학교 및 대학 수준의 연구뿐만 아니라 교육뿐만 아니라 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
변환 효율은 아래 설명하는 여러 가지 요인에 의해 결정됩니다 :
- 식물의 건강과 자신의 나이가 기본 중요합니다. 다수의 미숙 꽃 봉오리를 생산 약 한 달쯤 식물 이상적입니다. 변환하기 전에 보조 촬영 형성 3-4일 권장하는 기본 골인을 트리밍하는 것은 변환 효율을 증가합니다. 이전 식물 transformants을 일으키다하지만 낮은 비율로합니다.
- 식물의 불임은 중요하다. 하나는 감소 다…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
도움이 의견을 거스 – 절대 안전한 프로토콜 Paja Sijacic과 코트니 Hollender를 공유하기위한 거스와 그림 1, Detlef 위겔의 사진을 : 우리는 pTSO2 구축을위한 Chunxin 왕 감사합니다. Z. L S 실험실에서 연구는 미국 국립 과학 재단 (IOB0616096 및 MCB0744752)에 의해 지원됩니다. ZL는 부분적으로 메릴랜드 농업 실험 역 대학에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 6-benzyladenine | Sigma | 852430 | ||
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Toxic, wear gloves | ||
| Murashige and Skoog Basal medium (MS) | Sigma | M5519 | ||
| Gamborg’s vitamin solution 1000X | Sigma | G1019 | ||
| X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt | Biosynth | B-7300 | Toxic, light sensitive keep in the dark | |
| Micropore 3M Tape | Fisher | 19027761 |
References
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (6), 735-735 (1998).
- Wang, C., Liu, Z. Arabidopsis ribonucleotide reductases are critical for cell cycle progression, DNA damage repair, and plant development. Plant Cell. 18 (2), 350-350 (2006).
