Un modèle murin de In utero Transplantation
Summary
Le modèle murin de<em> In utero</em> La transplantation est un outil polyvalent qui peut être utilisée pour étudier les applications cliniques potentielles de la transplantation de cellules souches et la thérapie génique chez le fœtus. Dans ce protocole, nous présentons une approche générale de l'exécution de cette technique de
Abstract
La transplantation de cellules souches et les virus in utero a un énorme potentiel pour le traitement des affections congénitales chez le fœtus humain. Par exemple, la transplantation in utero (IUT) de cellules souches hématopoïétiques a été utilisé avec succès pour traiter les patients souffrant d'immunodéficience 1,2. Combinés dans plusieurs autres conditions, cependant, l'IUT a été tentée sans succès. 3 Compte tenu de ces résultats mitigés, la disponibilité d'une efficacité non-humain modèle pour étudier les séquelles biologiques de la transplantation de cellules souches et la thérapie génique est essentielle pour faire progresser ce domaine. Nous et d'autres ont utilisé le modèle murin de l'IUT d'étudier les facteurs affectant la prise de greffe réussie d'in utero transplanté des cellules souches hématopoïétiques dans les deux souris de type sauvage 4-7 et ceux avec les maladies génétiques. 8,9 L'environnement fœtal offre également des avantages considérables pour la succès de la thérapie génique in utero. Par exemple, la livraison de 10 adénoviraux, adéno-associés virale 10, 11 rétroviraux et les vecteurs lentiviraux 12,13 dans le foetus a abouti à la transduction de multiples organes à distance du site d'injection avec l'expression des gènes à long terme. In utero la thérapie génique peut donc être considérée comme une stratégie de traitement possible pour des maladies monogéniques comme la dystrophie musculaire ou la fibrose kystique. Un autre avantage potentiel de l'IUT est la capacité à induire une tolérance immunitaire à un antigène spécifique. Comme on le voit chez des souris atteintes d'hémophilie, l'introduction du facteur IX au début de résultats de développement dans la tolérance à cette protéine. 14
En plus de son utilisation dans les enquêtes sur d'éventuelles thérapies humaines, le modèle murin de l'IUT peut être un outil puissant pour étudier des questions fondamentales en biologie cellulaire du développement et de la tige. Par exemple, on peut offrir diverses petites molécules d'induire ou d'inhiber l'expression génique spécifique à définir les étapes de gestation et de manipuler les voies de développement. L'impact de ces modifications peut être évalué à différents points de temps après la transplantation initiale. Par ailleurs, on peut transplanter pluripotentes ou de la lignée des cellules progénitrices spécifiques dans l'environnement du fœtus à l'étude différenciation des cellules souches dans un milieu d'accueil non irradiés et imperturbable.
Le modèle de souris de l'IUT a déjà fourni des indications nombreuses dans les domaines de l'immunologie et la biologie cellulaire du développement et de la tige. Dans ce protocole basé sur la vidéo, nous décrivons une approche étape par étape pour effectuer IUT de fœtus de souris et un aperçu des étapes critiques et les pièges potentiels de cette technique.
Protocol
Discussion
Plus il ya 50 ans, Billingham, Brent et Medawar utilisé dans la transplantation in utero chez la souris pour induire une tolérance immunitaire aux protéines étrangères. 16 Depuis ce temps, plusieurs variantes de cette technique ont été utilisés pour répondre aux questions en immunologie et en biologie des cellules souches.
Le protocole détaillé ici est l'une des méthodes les plus accessibles pour les IUT. Le foie fœtal offre une cible facile à v…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier nos sources de financement: Le California Institute for Regenerative Medicine Clinical Fellow Formation Grant (AN), la National Science Foundation (MW), Irène Perstein Award (MTC), l'American College of Surgeons (MTC), l'American Pediatric Association chirurgical ( MTC), et le Mars of Dimes (MTC).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipettes | Kimble | 71900-100 | ||
| Pipette puller | Sutter Instruments Company | Model P-30 | ||
| Microinjector | Narishige | IM-300 | ||
| Pipette sharpener | Sutter Instruments Company | Model BV-10 |
References
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