Summary
O modelo do rato de<em> In utero</em> O transplante é uma ferramenta versátil que pode ser usado para estudar as possíveis aplicações clínicas do transplante de células-tronco e terapia genética no feto. Neste protocolo, apresentamos uma abordagem geral para realizar esta técnica
Abstract
O transplante de células-tronco e vírus no útero tem um tremendo potencial para o tratamento de doenças congênitas no feto humano. Por exemplo, no útero transplante (IUT) de células-tronco hematopoiéticas tem sido usada com sucesso para tratar pacientes com imunodeficiência combinada grave 1,2. Em outras condições, no entanto, IUT foi tentada sem sucesso. 3 Tendo em conta estes resultados mistos, a disponibilidade de um modelo não-humano eficiente para estudar as seqüelas biológicas do transplante de células-tronco e terapia genética é crítico para avançar nesse campo. Nós e outros autores utilizaram o modelo do rato de IUT para estudar os fatores que afetam o enxerto de sucesso no útero transplantado células-tronco hematopoéticas em ambos os camundongos selvagens 4-7 e aqueles com doenças genéticas. 8,9 O ambiente fetal também oferece vantagens consideráveis para o sucesso da terapia genética no útero. Por exemplo, a entrega de 10 adenoviral, adeno-associado viral 10, retroviral 11, e lentivirais 12,13 para o feto, resultou na transdução de múltiplos órgãos distantes do local da injeção de longo prazo da expressão gênica. In utero terapia genética pode ser considerada como uma estratégia possível tratamento para distúrbios de um único gene como a distrofia muscular ea fibrose cística. Outra vantagem potencial do IUT é a capacidade de induzir tolerância imunológica a um antígeno específico. Como pode ser visto em camundongos com hemofilia, a introdução do Fator IX no início de resultados de desenvolvimento da tolerância a essa proteína. 14
Além de seu uso em terapias investigando o potencial humano, o modelo do rato de IUT pode ser uma ferramenta poderosa para estudar questões básicas em biologia celular e de desenvolvimento tronco. Por exemplo, pode-se oferecer várias pequenas moléculas para induzir ou inibir a expressão de genes específicos em estágios definidos gestacional e manipular as vias de desenvolvimento. O impacto dessas alterações pode ser avaliada em vários pontos temporais após o transplante inicial. Além disso, pode-se transplante pluripotentes ou linhagem específica de células progenitoras no ambiente fetal para estudar a diferenciação de células-tronco em um ambiente de acolhimento não irradiados e imperturbável.
O modelo do rato de IUT já proporcionou inúmeros conhecimentos nas áreas de imunologia, biologia celular e de desenvolvimento e tronco. Neste protocolo baseado em vídeo, descrevemos uma abordagem passo-a-passo para realização de IUT em fetos de rato e delinear as etapas críticas e armadilhas potencial desta técnica.
Protocol
Discussion
Mais de 50 anos, Billingham, Brent e Medawar utilizado no útero transplante em camundongos para induzir tolerância imunológica a proteínas estranhas. 16 Desde esse tempo, diversas variações desta técnica têm sido usadas para tratar de questões na área de imunologia e biologia de células-tronco.
O protocolo detalhado aqui é um dos métodos mais acessíveis para IUT. O fígado fetal oferece um alvo fácil visualização e fornece acesso para a circulação sist?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gostaríamos de agradecer as nossas fontes de financiamento: O Instituto da Califórnia de Medicina Regenerativa Clinical Fellow Training Grant (AN), National Science Foundation (MW), Irene Award Perstein (TCM), American College of Surgeons (TCM), Associação Americana de Pediatria Cirúrgica ( TCM), e da March of Dimes (TCM).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipettes | Kimble | 71900-100 | ||
| Pipette puller | Sutter Instruments Company | Model P-30 | ||
| Microinjector | Narishige | IM-300 | ||
| Pipette sharpener | Sutter Instruments Company | Model BV-10 |
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