تحديد الآليات الكامنة وراء تلف العضلات أمر بالغ الأهمية. هنا نقدم تقنية النسيجي لإعداد البارافين المجمد وجزءا لا يتجزأ من المقاطع للعضلات الصدر ذبابة الفاكهة. هذا يسمح تحليل مورفولوجيا العضلات وتوطين البروتين وغيرها من مكونات الخلية العضلية.
التوصيف الجزيئي للضمور العضلات واعتلال العضلات في البشر قد كشف تعقيد مرض في العضلات والتحليل الجيني للمواصفات العضلات ، وقدمت وظيفة في تشكيل نموذج نظم معلومات قيمة حول فسيولوجيا العضلات. ولذلك ، وتحديد وتوصيف الآليات الجزيئية التي تكمن وراء تلف العضلات أمر بالغ الأهمية. بنية العضلات الكبار متعددة الألياف ذبابة الفاكهة تشبه العضلات المخططة الفقاريات (1) وقابلية الإستطراق الوراثي للذبابة الفاكهة جعلت من نظام رائع لتحليل التصنع مورفولوجيا العضلات وتوصيف العمليات التي تؤثر على وظيفة العضلات في البالغين المسنين الذباب 2. هنا نقدم تقنية النسيجي لإعداد البارافين المجمد وجزءا لا يتجزأ من المقاطع للعضلات الصدر ذبابة الفاكهة. تسمح هذه الاستعدادات للأنسجة أن تكون ملطخة البقع النسيجية الكلاسيكية والبروتين المسمى مع الأصباغ كشف ، وتحديدا cryosections مثالية للكشف المناعى من البروتينات في عضلات سليمة. وهذا يسمح لتحليل بنية النسيج العضلي ، وتحديد العيوب الشكلية ، والكشف عن نمط التعبير عن العضلات / عصبون محددة البروتينات في العضلات الكبار ذبابة الفاكهة. ويمكن أيضا أن تكون هذه التقنيات معدلة بشكل طفيف لsectioning من أجزاء أخرى من الجسم.
The authors have nothing to disclose.
نشكر الأستاذ Eichele على السماح لنا استخدام مشراح البرد. وقد تم تمويل العمل ماكس بلانك Gesselschaft.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |