Identificación de los mecanismos que subyacen a daño muscular es crucial. Aquí se presenta la técnica histológica para la preparación de parafina y las secciones congeladas de los músculos torácicos Drosophila. Esto permite el análisis de la morfología del músculo y la localización de las proteínas y otros componentes de la célula muscular.
La caracterización molecular de las distrofias musculares y miopatías en los seres humanos ha puesto de manifiesto la complejidad de la enfermedad del músculo y el análisis genético de la especificación de los músculos, la formación y funciones de los sistemas modelo ha proporcionado información valiosa sobre la fisiología del músculo. Por lo tanto, identificar y caracterizar los mecanismos moleculares que subyacen en el daño muscular es fundamental. La estructura de los adultos Drosophila multi-fibra de los músculos de los vertebrados se parecen a los músculos estriados 1 y la trazabilidad genética de la Drosophila ha hecho un gran sistema para analizar la morfología del músculo distrófico y caracterizar los procesos que afectan la función muscular en el adulto mayor moscas 2. Aquí se presenta la técnica histológica para la preparación de parafina y las secciones congeladas de los músculos torácicos Drosophila. Estas preparaciones permiten que el tejido se puede teñir con tinciones histológicas clásicas y etiquetados con tintes detectar proteínas, y en concreto cryosections son ideales para la detección inmunohistoquímica de las proteínas en los músculos intactos. Esto permite el análisis de la estructura del tejido muscular, la identificación de defectos morfológicos, y la detección del patrón de expresión de los músculos / las neuronas específicas de las proteínas en los músculos de los adultos de Drosophila. Estas técnicas también pueden ser ligeramente modificados para el corte de otras partes del cuerpo.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos al Prof. Eichele de lo que nos permite utilizar la crio-microtomo. El trabajo fue financiado por el Max-Planck-gesselschaft.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |