胎児マウスから海馬ニューロンの単離および培養
Summary
私達は非常にフィーダーグリア細胞層を使用せずに出生マウスの脳から海馬神経細胞の精製培養のためのプロトコルを提供しています。
Abstract
ラットおよびマウスの海馬ニューロンの初代培養は広く神経生物学で細胞メカニズムを明らかにするために使用されています。個々のニューロンを分離し、成長させることにより、研究者は細胞輸送、細胞の構造と生化学的な様々な技術を使用して、個々のタンパク質の局在化に関連するプロパティを分析することができます。このような実験の結果から、記憶や学習の神経基盤を扱う理論をテストするために重要である。しかし、実験のこれらの形態から明白な結果は、他の脳細胞の種類によって最小汚染と神経細胞の培養物を成長させる能力を前提としています。このプロトコルでは、我々は、汚染の細胞タイプ（すなわち、アストロサイト）を最小限に抑えながら、健全な神経細胞の成長を最適化するために、ニューロンの成長と胚の海馬組織を慎重に解剖用に設計された特定のメディアを使用しています。マウス胎児海馬組織は、ジのサンプルの大きさのために類似したげっ歯類の組織より単離することが難しくなる可能性がありますssection。我々は、胚性19日目（E19）仔マウスから海馬の詳細な解剖の技術を示しています。一度海馬組織が分離されている個々のセルに最小ダメージを提供しながら、神経細胞の穏やかな解離は、トリプシンと結合組織から独立した細胞に設計された機械的破壊の希釈濃度で達成されます。混乱に使用するピペットを準備する方法の詳細な説明が含まれています。最適なメッキ密度が成功した細胞培養を最大化するための免疫蛍光のプロトコルのために用意されています。プロトコルは、マウス海馬組織から神経細胞の培養のための、高速（約2時間）と効率的な手法を提供しています。
Protocol
Discussion
海馬の培養は20年以上分子生物学で使用されている。原理的には、神経細胞培養物は、脳のどの部分から作ることができますが、海馬の培養物は、海馬7の神経細胞集団の比較的単純なアーキテクチャにより、最も人気があることが実証されています。海馬培養は、通常、後期胚組織から作られています。この組織は解離しやすくなり、成熟した脳組織1よりも少ないグリア細?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、原稿を準備する際に彼の助けのために博士マイケルウーテンに感謝します。この作品は、NIH 2RO1NS033661（MWW）によってサポートされていました。
Materials
| Name of Reagent | Vendor | Catalog Number |
| Rat Tail Collagen 1 | BD Biosciences | 354236 |
| Poly-D-lysine Solution | Chemicon | A-003-E |
| Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14175-095 |
| Trypsin Solution (1X) 0.25%, liquid | Invitrogen | 15050-065 |
| NeuroBasal Medium (1X) liquid | Invitrogen | 21103-049 |
| B27 Supplement (50X) liquid | Invitrogen | 17504-044 |
| L-Glutamine 200 mM (100X) liquid | Invitrogen | 25030-149 |
| Penicillin (10,000 units/ml) / Streptomycin (10,000 μg/ml) | Invitrogen | 15140-148 |
| HI-Donor Horse Serum | Atlanta Biologicals | S12150H |
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