태아 쥐의 Hippocampal 신경 세포의 분리 및 문화
Summary
우리는 고도로 피더 glial 세포 레이어를 사용하지 않고 태아 쥐 두뇌의 hippocampal 뉴런을 정화의 문화에 대한 프로토콜을 제공합니다.
Abstract
쥐, murine hippocampal 뉴런의 차 문화를 널리 신경 생물학에서 세포 메커니즘을 공개하는 데 사용됩니다. 개별 뉴런을 분리하고 성장함으로써, 연구자들은 세포 인신 매매, 세포 구조 및 생화 학적 기법의 다양한 사용하여 개별 단백질 지방화에 관련된 특성을 분석할 수 있습니다. 이러한 실험의 결과는 메모리와 교육의 신경 기초를 다루는 이론을 테스트하기 위해 중요합니다. 그러나 실험의 이러한 형태의 모호하지 않은 결과가 다른 뇌 세포 유형별로 최소 오염 물질로의 연결을 문화를 성장 능력에 predicated있다. 이 프로토콜에서는 오염 세포 유형 (즉, astrocytes)를 최소화하면서 건강한 뉴런의 성장을 최적화하기위한 배아 hippocampal 세포의 신경 세포의 성장과주의 해부용으로 설계된 특정 미디어를 사용합니다. 배아 마우스 hippocampal 조직이 디위한 표본의 크기로 인해 유사한 설치류 조직보다 분리가 더 어려울 수ssection. 우리는 배아 일 19 일 (E19) 마우스 새끼에서 해마의 상세한 해부 기술을 보여줍니다. 개별 셀에 대한 최소한의 손상을 제공하면서 일단 hippocampal 조직은 고립되고, 세포의 연결을 부드럽게 분리는 트립신과 결합 조직 세포와는 별도로 고안된 기계 혼란의 묽은 농도로 이루어진다. 장애에 사용되는 pipettes을 준비하는 방법에 대한 자세한 설명이 포함되어 있습니다. 최적의 도금 밀도는 성공적인 세포 배양을 최대화하기 위해 immuno-형광 프로토콜 제공되었습니다. 프로토콜은 마우스 hippocampal 세포에서 세포의 연결의 문화에 대한 빠른 (약 2 시간)하고 효율적인 기술을 제공합니다.
Protocol
Discussion
Hippocampal 문화는 20여 년 동안 분자 생물학에서 사용되었습니다. 원칙적 동안의 연결을 문화가 두뇌의 어떤 부분에서 만들 수 있고, hippocampal 문화는 해마 7의 신경 세포 인구의 상대적으로 단순한 구조로 인해 가장 인기있는 것으로 입증되었습니다. Hippocampal 문화는 일반적으로 말기 배아 조직에서 만들어진다. 이 조직은 해리 쉽게이며 성숙 뇌 조직을 한 사람보다 적게 glial 세포?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 원고를 준비하는 그의 도움 박사 마이클 Wooten 감사드립니다. 이 작품은 NIH 2RO1NS033661 (MWW)에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Reagent | Vendor | Catalog Number |
| Rat Tail Collagen 1 | BD Biosciences | 354236 |
| Poly-D-lysine Solution | Chemicon | A-003-E |
| Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14175-095 |
| Trypsin Solution (1X) 0.25%, liquid | Invitrogen | 15050-065 |
| NeuroBasal Medium (1X) liquid | Invitrogen | 21103-049 |
| B27 Supplement (50X) liquid | Invitrogen | 17504-044 |
| L-Glutamine 200 mM (100X) liquid | Invitrogen | 25030-149 |
| Penicillin (10,000 units/ml) / Streptomycin (10,000 μg/ml) | Invitrogen | 15140-148 |
| HI-Donor Horse Serum | Atlanta Biologicals | S12150H |
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