Waiting
Traitement de la connexion…

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Published: February 21, 2012 doi: 10.3791/3894
Automatic Translation
1, 2, 1, 2, 2, 1
1Microbiology and Pathogenesis Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, 2Tick-Borne Diseases Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention

Summary

جمع الدملمف القراد المصابة، والغدد اللعابية، واللعاب مهم لدراسة كيفية ينقلها القراد مسببات الأمراض تسبب المرض. في هذا البروتوكول نحن لشرح كيفية جمع الدملمف والغدد اللعابية من تغذية

Abstract

تم العثور على القراد في جميع أنحاء العالم وتصيب البشر الذين يعانون من أمراض التي تنتقل بواسطة القراد كثيرة. القراد هي الناقلة لمسببات الأمراض التي تسبب مرض لايم والتي ينقلها القراد الحمى الراجعة (البورلية SPP).، الجبال الصخرية المبقعة (الريكتسية الريكتسية)، ehrlichiosis (الإيرليخية chaffeensis الخيلية وهاء)، anaplasmosis (Anaplasma phagocytophilum)، والتهاب الدماغ (القراد التي تنتقل عن طريق فيروس التهاب الدماغ)، البابيزيا (البابسية النيابة.)، كولورادو حمى القراد (Coltivirus)، وحمى الأرانب (الفرنسيسيلة التولارية) 1-8. إلى أن تنتقل بشكل صحيح في استضافة هذه العوامل المعدية تنظيم تفاضلي التعبير الجيني، والتفاعل مع البروتينات القراد، والهجرة من خلال وضع علامة 3،9-13. على سبيل المثال، وكيل مرض لايم، البورلية burgdorferi، يتكيف من خلال التعبير الجيني الفارق الى مراحل وليمة ومجاعة من دورة القراد في متوطن بالحيوانات 14،15. وعلاوة على ذلك، باعتباره علامة اللبود يستهلكbloodmeal البورلية تكرار والهجرة من المعى المتوسط ​​في الجوف الدموي الأمامي، حيث يسافرون إلى الغدد اللعابية وتنتقل إلى المضيف مع لعاب طرد 9،16-19.

كما وضع علامة يغذي المضيف يستجيب عادة مع استجابة مناعية قوية مرقئ والفطرية 11،13،20-22. على الرغم من هذه الردود المضيفة، I. ويمكن تغذية الكتفي لعدة أيام بسبب لعاب القرادة يحتوي على البروتينات التي هي المناعية، وكلاء التحللي، مضادات التخثر، وfibrinolysins للمساعدة في تغذية 3،11،20،21،23 القراد. الأنشطة المناعية التي تمتلكها لعاب القراد أو مستخلص الغدة اللعابية (SGE) تسهيل انتقال والانتشار، ونشر مسببات الأمراض التي تنتقل بواسطة القراد العديد من 3،20،24-27. لمزيد من فهم الكيفية التي تنتقل بواسطة القراد العوامل المعدية تسبب المرض لا بد من تشريح بنشاط تغذية القراد وجمع لعاب القراد. هذا الفيديو يشرح تقنيات بروتوكول للتشريحجمع الدملمف وإزالة الغدد اللعابية من تغذية بنشاط أولا الحوريات الكتفي بعد 48 و 72 فأر آخر التنسيب ساعات. علينا أن نبرهن أيضا جمع اللعاب من I. البالغات الكتفي القراد.

Protocol

1. جمع الدملمف لإعداد الشرائح

(فيلم 1)

  1. إزالة القراد بلطف بنشاط تغذية من حيوان ومكان في 3٪ بيروكسيد الهيدروجين موضعي لمدة 5 دقائق ثم في الايثانول 70٪ لمدة 10 دقائق على سطح تعقيم.
  2. مع القلم حلمة الثدي رسم دائرة على شريحة المجهر المغلفة silane ووضع علامة داخل حلمة الثدي دائرة من ركلة جزاء.
    1. وتستخدم الشرائح المغلفة Silane للحصول على أفضل تمسك الدملمف إلى الشريحة المجهر.
  3. عرض القراد تحت المجهر تشريح (1X الهدف، العدسة 10X، التكبير الإصدار 3.5x).
  4. دفع برفق لأسفل على ظهر القراد مع ملقط لتباعد الساقين القراد وجمد القراد.

ملاحظة: عندما شل حركة القراد لا تضغط من الصعب جدا لأن هذا قد يعطل المعي المتوسط ​​أو ثقب القراد وتلوث الدملمف.

  1. بتر ساق القراد أو الساقين في اله مشترك مع القاصي نقطة غرامة مشرط القابل للتصرف. لتحديد العدوى عن طريق اللمف فقط 1 ساقه يحتاج إلى بتر. قد لجمع الدملمف على شريحة يتم بتر ساقيه عدة.

ملاحظة: لا قطع الساق قريبة جدا من الجسم، لأن هذا قد يسبب تلوث المعي المتوسط ​​من اللمف.

  1. بعد أن يتم قطع الساق أو الساقين الاستمرار في تطبيق الضغط بلطف على ظهر القراد في لالدملمف لإفراز من ساقيه على الشريحة. تحرك بلطف القراد حول على الشريحة لنشر الدملمف.

2. إزالة الغدة اللعابية

(أفلام 2 و 3)

  1. مخزنة بقعة عدة برك 25 ميكرولتر من الفوسفات المالحة (PBS) على شريحة المجهر ووضع علامة في واحدة من برك برنامج تلفزيوني.
  2. عرض القراد تحت المجهر تشريح (1X الهدف، العدسة 10X، التكبير الإصدار 3.5x).
  3. استقرار القراد مع forcep الرؤوس غرامةق من خلال عقد رؤيس أساس (أجزاء الفم) أو الجزء الخلفي من القراد.
  4. إدراج ملقط غرامة يميل إلى الجزء الخلفي من التجزئة وشريحة تصل القراد ما ظهر لكشف الأجهزة. ويمكن إذا رغبت يمكن إزالة المعي المتوسط ​​في هذا الوقت، ونقل إلى مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني على شريحة مجهر أو إلى أنبوب microfuge التي تحتوي على برنامج تلفزيوني.
  5. العثور على زوج من الغدد اللعابية (مثل عناقيد العنب) الواقعة بجانب ثنائي الساقين من القراد. إذا الغدد اللعابية ليست واضحة بين الركام القراد نقل جزء التجزئة الرئيسية، والتي لا تزال تتضمن الغدد اللعابية، إلى مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني للحد من الفوضى وفقدان الغدد اللعابية.

ملاحظة: في وقت سابق في التغذية، والغدد اللعابية هي أصعب لتحديد مكان لأنهم ليسوا كما وضعت مقارنة في وقت لاحق في التغذية.

  1. إزالة الغدد اللعابية من القراد مع ملقط الرؤوس وغرامة مكان في بركة جديدة من برنامج تلفزيوني.
  2. واييميل ال غرامة ملقط نقل الغدد اللعابية إلى أخرى نظيفة 25 تجمع PBS ميكرولتر، كرر هذه الخطوة غسيل 3-4 مرات أكثر لإزالة أي الكائنات الحية الدقيقة الخارجي والحطام القراد.

ملاحظة: تغسل عناقيد الغدة اللعابية بلطف للحد من الخسائر وتعطل الغدد اللعابية الفردية.

  1. وضع الغدد في بركة نظيفة من برنامج تلفزيوني على شريحة المغلفة silane أو في أنبوب microfuge التي تحتوي على برنامج تلفزيوني.

3. لعاب جمع

(فيلم 4)

  1. إزالة القراد بلطف البالغات من الأرنب أو المضيفة الأخرى باستخدام ملقط الرؤوس غرامة قبل قليل من غلبه النعاس محتقن تماما، 5-7 أيام تقريبا في مرحلة ما بعد المرفق.
  2. تلتزم القراد محتقن تقريبا على واحدة من نهاية شريحة المجهر مع لاصق شفاف. يجب وضع الشريط حوالي ثلاث أرباع الطريق حتى ظهر القراد تجاه رأسه، وترك رؤيس القراد في الأساس (أجزاء الفم) عرضة للخطر.
  3. حيث يلتقي الشريط حافة الأمامي من ميكرولتر القراد السطح الظهري 5 الماصة من حل بيلوكاربين 5٪ (في الميثانول). السماح للشريط على ذبالة من بيلوكاربين على القراد وظهر، دون السماح للبيلوكاربين لتأتي في اتصال مع رؤيس أساس القراد و.
  4. تركيب قطعة من الصلصال غير سامة على الشريحة مجهر حوالي بوصة واحدة من فمها القراد و.
  5. باستخدام ملقط الرؤوس غرامة قطع رأس أنبوب شعري وسحبت 28 إلى القطر المطلوب.
  6. عرض رؤيس القراد في الأساس تحت المجهر تشريح.
  7. تناسب بلطف الكارح القراد حيز الأنبوب الشعرية سحبت السماح للpalps العلوية الموجودة على السطح الخارجي للأنبوب شعري.
  8. اضغط على الطرف الآخر من الأنابيب الشعرية في الصلصال لعقد أنبوب شعري في مكان.
  9. ضع علامة شنت الترويل داخل غرفة مظلمة مع ارتفاع نسبة الرطوبة (على سبيل المثال، مربع الستايروفوم بغطاء اصطف مع حلمة الثدي الرطب المناشف إيه). إمالة الشريحة وبالتالي فإن نقاط الكارح إلى أسفل الحاوية، والسماح الجاذبية للمساعدة في جمع اللعاب.
  10. وضع الحاوية في درجة حرارة الغرفة.
  11. ترصد عن كثب القراد عاب لأول ساعة، وجمع اللعاب كما هي ولدت عن طريق طرد عليه للخروج من أنابيب شعرية مع لمبة الماصة باستور. بعد الساعة الأولى، تحقق تراكم كل ساعة ما لا يقل عن 4 ساعات. الاستمرار في جمع لعاب كما هي ولدت.

ملاحظة: يمكن وقفها اكتساب اللعاب مرة واحدة ويتم جمع ما يكفي من اللعاب لهذه الدراسة التي يتم تنفيذها.

  1. إذا القراد لا عاب أو إذا كان المطلوب أكثر اللعاب، ويمكن أن يتسبب في بعض الأحيان اللعاب باستخدام الأنابيب الشعرية لتدليك الكارح.
  2. إضافة 0.1 أحجام كوكتيل مثبط البروتياز لعاب ومخزن في -80 درجة مئوية لحين الحاجة إليها.

4. ممثل النتائج

e_content "> فيلم 1 يوضح كيفية اجراء حورية أولا يتغذى جزئيا الكتفي وبتر الساقين لجمع الدملمف على شريحة المجهر. وحالما يتم بتر الساق أو الساقين ويفرز السائل واضح (الشكل 1A و 1B). وإذا كان المعي المتوسط يتمزق الدملمف يبدو غائما كما هو يخرج من بتر ساقه (ق) (1C شخصية و1D).

ويتجلى استخراج الغدد اللعابية بعد حورية تم تغذية لمدة 48 أو 72 ساعة في أفلام 2 و 3. بعد ثقب القراد هناك عادة الكثير من الحطام (تتألف من القصبة الهوائية، مالبيغي الأنابيب والدم والأنسجة الضامة وغيرها)، لمنع فقدان أو اختلال في الغدد اللعابية تحريك علامة على مجموعة جديدة من برنامج تلفزيوني. وتظهر الأرقام 2A 2B حيث توجد الغدد اللعابية بعد أن تم قطع حورية مفتوحة ويوضح الشكل 2C إزالة كتل الغدد اللعابية في بركة من برنامج تلفزيوني.

جمع اللعاب من إعداد أولا الإناث البالغات الكتفي أنا ق هو مبين في فيلم (4) والشكل (3). ويلاحظ وجود علامة الترويل في أنبوب شعري في الفيلم 5. هذه الطريقة في جمع اللعاب المستخدمة بيلوكاربين لتحفيز اللعاب ويمكن أن تسفر عن أكثر من 20 ميكرو لتر من اللعاب في القراد البالغات.

الشكل 1.
الشكل 1. الهياكل إعتبر من حورية الكتفي أولا.

فيلم 1. اللبود جمع الدملمف الكتفي. اضغط هنا لمشاهدة الفيلم .

الشكل 2.
الشكل 2. غير ملوثة (A & B)، والملوثة (C & D) الدملمف تنزح من مباراة الذهاب في لحورية.

فيلم 2. استخراج الغدة اللعابية من I. ساعة الاحتياطي الفيدرالي 48 الكتفي حورية.pload/3894/3894movie2.avi "> اضغط هنا لمشاهدة الفيلم.

فيلم 3. استخراج الغدة اللعابية من I. ساعة الاحتياطي الفيدرالي 72 حورية الكتفي. اضغط هنا لمشاهدة الفيلم .

الشكل 3.
الشكل 3. اللبود الكتفي الغدد اللعابية حورية. (A & B) أمثلة من الغدد اللعابية في حورية ساعة تغذيها 72، قبل الاستخراج. (ج) إزالة الغدة اللعابية العنقودية.

فيلم 4. جمع اللعاب إعداد أولا من الكبار القراد الإناث الكتفي. اضغط هنا لمشاهدة الفيلم .

الشكل 4.
الشكل 4. جمع اللعاب من الكبار أولا الإناث تي الكتفيicks. (أ و ب) ضع علامة توضع على شريحة مع الكارح لها في النهاية انسحبت من الأنابيب الشعرية مع نهاية unpulled من الأنابيب الشعرية التي عقدها الصلصال. (C & D) غرفة تحتوي على مرطب الترويل أولا الكبار أنثى القراد الكتفي.

فيلم 5. اللبود الكتفي القراد الإناث الترويل في أنبوب شعري. اضغط هنا لمشاهدة الفيلم .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

جمع الدملمف القراد، الغدد اللعابية، واللعاب مهم في دراسة ينقلها القراد انتقال مسببات المرض وانتشاره، ونشر، والانتشار، والمثابرة في التجزئة على حد سواء والمضيف 6،11-13،20،23،29. هناك عدة طرق لتشريح وضع علامة 30،31. ومع ذلك، عندما جمع الغدد اللعابية من الأهمية بمكان تشريح التجزئة حتى لا يتم بشكل صحيح تمزق الغدد اللعابية او فقدت في بقايا القراد و. حالما تتم إزالة الغدد اللعابية من القراد أنها بحاجة إلى غسلها عدة مرات لإزالة التلوث المعي المتوسط ​​ومن ثم يمكن ان تكون ثابتة على شريحة لتلطيخ أو الأرض في برنامج تلفزيوني للحصول على غدة اللعابية استخراج (شركة سوسيتيه جنرال). شركة سوسيتيه جنرال هي الأسهل لجمع من اللعاب وتمتلك سمات مشابهة لعاب، وبالتالي، يمكن استخدامه كبديل لعاب. ومع ذلك، SGE تحتوي على بروتينات إضافية تنشأ من خلايا الغدد اللعابية التي ليست موجودة في لعاب القرادة. وبالإضافة إلى ذلك من البروتينات اضافية في شركة سوسيتيه جنرال باء يمكنه ميزة أو وضع غير مؤات تبعا للدراسة التي يتم تنفيذها، ولكن هو شيء الباحث يحتاج إلى أن تكون على علم عند العمل مع شركة سوسيتيه جنرال. شركة سوسيتيه جنرال لديه ميزة أنه لم يتم استخدام بيلوكاربين خلال مجموعة من الغدد اللعابية. وقد تبين بيلوكاربين، وكيل المسكارينية محاكي الكولين الذي يقوم بدور ناهض للخلاص، أن يكون لها تأثير سام للخلايا على B. burgdorferi خلال جمع اللعاب 32،33. الدوبامين هو آخر ناهض من اللعاب ولكنها دمرت بشكل سريع من قبل الدملمف والسوائل التجزئة الأخرى، بالمقارنة مع بيلوكاربين يكون له أثر مستدام 33. تم استكشاف تقنيات تنشيطية أخرى لجمع اللعاب وعرضت جميع أن تؤثر على تكوين لعابي 34.

ويمكن جمع الدملمف يكون صعبا لأن القراد تتحرك وأنه يمكن أن يكون مشكلة في شل دون تمزيق المعي المتوسط. شل حركة القراد مع الشريط مزدوجة من جانب خيار، ولكن لطاهيةويمكن أن تضيع الليمفاوية على الشريط إذا لم تتم إزالة القرادة. وقد جمعت دراسات أخرى الدملمف من القراد عدة بقطع ساقيه القراد لفي مفاصل البعيدة واستخدام الطرد المركزي لجمع الدملمف 16،35. بمجرد يتقن جمع الدملمف يمكن استخدامها لتحديد العدوى الدملمف القراد، ضع علامة على تفاعل العوامل المسببة للأمراض، وهجرة من مسببات الأمراض من المعى المتوسط ​​في الغدد اللعابية.

على الرغم من أن التركيز مختبرنا هو على B. burgdorferi وI. ويمكن استخدام القراد الكتفي، التقنيات المذكورة في هذا البروتوكول لدراسة أخرى ينقلها القراد العوامل المعدية ووضع علامة الأنواع. وعلاوة على ذلك، يمكن أيضا أن تستخدم هذه التقنيات في الحوريات أو البالغين مع السهولة النسبية. ويمكن استخدام هذه التقنيات مع يرقة تكون صعبة نظرا لحجمها. حتى يتم يتقن أسلوب تشريح يقترح استخدام القراد غير مصاب. من المهم أيضا أن تمارس السليم تدابير السلامة البيولوجية عند تشريح العدوىتيد أو مجال جمع القراد. ويمكن استخدام الأساليب في هذا البروتوكول الفيديو والمبادئ التوجيهية بشأن كيفية القيام بتشريح التجزئة وما الذي تبحث عنه عند تنفيذ هذه التقنيات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدينا ما يكشف.

Acknowledgments

الكتاب أود أن أشكر شعبة المحمولة بالنواقل فرع أمراض الثروة الحيوانية، وتحديدا اندريا بيترسون، ليزا المسعودي، اوبراين فيرنا، وجون ليدل لرعايتهم والحفاظ على الفئران والارانب. ونود أيضا أن نشكر ايمي أولمان، تيريزا راسيل، وباربرا جونسون J. لما قدموه من مساهمات لتحقيق هذا المخطوط. أخيرا، نود أن نعترف العيسى إيكرت في مكتب المدير المساعد للاتصالات في مركز السيطرة على الأمراض لإنتاج الرسوم البيانية والرسوم التوضيحية لافيل جودي لتوجيه جميع الجوانب القانونية المرتبطة تصوير هذا المخطوط.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hydrogen peroxide Fisher Scientific H312-500
Ethanol Acros Organics 61509-5000
PBS Boston Bioproducts BM-2205
Dumont Fine forceps (3C) Fisher Scientific NC9906085
Silane treated microscope slides Bioworld 42763007-1
Pap pen Bioworld 21750008-1
Super frost plus microscope slides Fisher Scientific 12-550-18
Pilocarpine Sigma-Aldrich P6503-5G
Protease inhibitor cocktail Sigma-Aldrich P2714
#11 disposable scalpel Feather Safety Razor Co, Ltd. 2975#11
Nontoxic modeling clay Fisher Scientific S17307
Capillary tubes Chase Scientific Glass, Inc. 40A502

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What's eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
  2. Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
  3. Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. Vector-host interactions in disease transmission. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).
  4. Estrada-Pena, A., Jongejan, F. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).
  5. Nuttall, P. A. Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus. Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).
  6. Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. Enhancement of virus transmission by tick salivary glands. J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).
  7. Labuda, M., Nuttall, P. A. Tick-borne viruses. Parasitol. 129, 221-245 (2004).
  8. Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. Update on tick-borne bacterial diseases in Europe. Parasite. 16, 259-273 (2009).
  9. Zhang, L., et al. Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph. PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).
  10. Piesman, J., Schneider, B. S. Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks. Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).
  11. Brossard, M., Wikel, S. K. Tick immunobiology. Parasitol. , Suppl 129. S161-S176 (2004).
  12. Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo. Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).
  13. Nuttall, P. A., Labuda, M. Tick-host interactions: saliva-activated transmission. Parasitol. 129, 177-189 (2004).
  14. Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host. FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).
  15. Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis. Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).
  16. Dunham-Ems, S. M., et al. Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks. Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).
  17. Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).
  18. Piesman, J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi. Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).
  19. De Silva, A. M., Fikrig, E. Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding. Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).
  20. Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).
  21. Brossard, M., Wikel, S. K. Immunology of interactions between ticks and hosts. Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).
  22. Wikel, S. K. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission. Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).
  23. Binnington, K. C., Kemp, D. H. Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission. Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).
  24. Guo, X., et al. Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins. Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).
  25. Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils. Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).
  26. Lima, C. M., et al. Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut. J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).
  27. Severinova, J., et al. Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice. Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).
  28. How to pull capillary tubes [Internet]. , benchflydotcom. Available from: http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM (2009).
  29. Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts. Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).
  30. Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).
  31. Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide. Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).
  32. Ledin, K. E., et al. Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum. Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).
  33. Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva? Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).
  34. Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods. J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).
  35. Burgdorfer, W. Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).

Tags

علم المناعة، العدد 60،
اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Patton, T. G., Dietrich, G., Brandt, … More

Patton, T. G., Dietrich, G., Brandt, K., Dolan, M. C., Piesman, J., Gilmore Jr., R. D. Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks. J. Vis. Exp. (60), e3894, doi:10.3791/3894 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter