Оценивая секреторную способность ацинарных клетках поджелудочной железы
Summary
Изолированные поджелудочной ацинусы сохраняют свою морфологию в естественных условиях и активность и предложить эффективные способы для контроля и манипулирования секрецию. Эта работа показывает, как ацинусы может быть выделен из поджелудочной железы мыши, и как их секреторные возможности могут быть оценены.
Abstract
Ацинарных клетках поджелудочной железы производят и выделяют пищеварительные ферменты. Эти клетки организованы в виде кластера, который формирует и акций совместного просвет. Эта работа показывает, как секреторную способность этих клеток можно оценить с помощью культуры изолированных ацинусов. Установка является предпочтительным, так как изолированные ацинусов, которые сохраняют многие характеристики интактной экзокринной поджелудочной железы можно манипулировать и контролировать легче, чем на животное в целом. Правильное выделение панкреатического ацинусов является ключевым требованием, чтобы экс естественных культура будет представлять природу в естественных условиях в ацинусов. Протокол показывает, как изолировать нетронутыми ацинусы из поджелудочной железы мыши. Впоследствии два взаимодополняющих методов оценки секреции поджелудочной железы представлены. Секреция амилазы анализ выступает в качестве глобального меры, в то время как прямая визуализация секреции поджелудочной железы позволяет характеризовать секреции в суб-клеточная резолюции. В совокупности эти методы изложеТед здесь включить широкий спектр экспериментов по изучению секреции экзокринную.
Introduction
Экзокринной поджелудочной железы составляет большую часть массы поджелудочной железы млекопитающих и посвящен производству и секреции пищеварительных ферментов 1. Функциональная единица экзокринной части поджелудочной железы, ацинуса, представляет собой кластер из эпителиальных клеток, который образует и акций совместного просвет. После гормональной стимуляции или нейронов, пузырьки, наполненные ферментами транспортируются к апикальной поверхности клетки, предохранитель с ним и удалить их содержание в просвет 1-3. В секретируемые ферменты затем сливают на поглощающем множестве каналов в тонкую кишку, где они катализируют расщепление пищи в питательные вещества.
Это видео демонстрирует, как нетронутыми ацинусы изолированы от всей поджелудочной железы и как их секреторная способность можно оценить. Используя эту настройку, поджелудочной секреции количественно путем измерения относительного количества амилазы, который был выпущен после стимуляции. В качестве альтернативы, выделение могут быть отображены в прямом эфире использованием различныхдатчики и красители.
Экс естественных настройка поджелудочной ацинусов является предпочтительным, так как изолированные ацинусы, которые сохраняют многие характеристики интактных поджелудочной железы, можно манипулировать и контролировать легче, чем на животное в целом 4-6. Эта установка была разработана в конце 1970-х и был так расширен для изучения нескольких экзокринных тканей, таких как слюнных и молочных желез 3-7. Примечательно, что позволяет изучение секреции с минимальным вмешательством в сложных клеточных организациями этих поляризованных эпителия.
Protocol
Representative Results
Discussion
Кроме того, экс естественных культуры, альтернативные установки для изучения экзокринной секреции включают прижизненный микроскопии и измерения жидкостей из поджелудочной железы. Прижизненные микроскопии было показано, что хорошо работает в слюнных желез мыши 10. Этот мет?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа финансировалась за счет гранта от американо-израильских ЧФ на БС и EDSBS является действующий профессорско кресле Хильда и Сесил Льюис в молекулярной генетики.
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
References
- Williams, J. A. Regulation of pancreatic acinar cell function. Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).
- Schnekenburger, J., et al. The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).
- Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).
- Amsterdam, A., Jamieson, J. D. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).
- Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini. The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).
- Jerdeva, G. V., et al. Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells. Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).
- Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini. Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).
- Bi, Y., Williams, J. A. A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini. Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).
- Palade, G. Intracellular aspects of the process of protein synthesis. Science. 189, 867 (1975).
- Masedunskas, A., et al. Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).
- Petersen, H., Grossman, M. I. Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats. The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).
- Riedl, J., et al. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin. Nat Methods. 5, 605-607 (2008).
- Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).
