La evaluación de la capacidad secretora de las células pancreáticas acinares
Summary
Acinos pancreáticos aislados conservan su morfología y actividad in vivo y ofrecen maneras de gran alcance para el seguimiento y la manipulación de la secreción. Este trabajo demuestra cómo acinos se pueden aislar a partir del páncreas de ratón, y cómo se pueden evaluar sus capacidades secretoras.
Abstract
Células acinares pancreáticas producen y secretan las enzimas digestivas. Estas células están organizadas como un grupo que forma un lumen y acciones conjuntas. Este trabajo demuestra cómo la capacidad secretora de estas células puede evaluarse por cultivo de acinos aislados. La configuración es ventajosa, ya aislado acinos, que conservan muchas de las características del páncreas exocrino intacta puede ser manipulado y controlado más fácilmente que en el animal entero. Aislamiento adecuado de los acinos pancreáticos es un requisito clave para que el cultivo ex vivo representará a la naturaleza in vivo de los acinos. El protocolo demuestra cómo aislar acinos intacta desde el páncreas de ratón. Posteriormente, se presentan dos métodos complementarios para la evaluación de la secreción pancreática. El ensayo de secreción de amilasa sirve como una medida global, mientras que la imagen directa de la secreción pancreática permite la caracterización de la secreción a una resolución subcelular. Colectivamente, las técnicas PresenTed aquí, permite un amplio espectro de experimentos para estudiar la secreción exocrina.
Introduction
El páncreas exocrino constituye la mayor parte de la masa del páncreas de mamíferos y está dedicada a la producción y secreción de enzimas digestivas 1. La unidad funcional del páncreas exocrino, el acino, es un grupo de células epiteliales que forman y comparte un lumen conjunta. Tras la estimulación hormonal o neuronal, vesículas llenas de enzimas son transportados a la superficie celular apical, fusible con ella y expulsan su contenido en el lumen 1-3. Las enzimas secretadas se escurrieron entonces por un conjunto de coalescencia de los conductos en el intestino delgado, donde se catalizan la descomposición de los alimentos en nutrientes.
Este video muestra cómo acinos intacta se aisló de todo el páncreas y cómo su capacidad secretora se puede evaluar. Utilizando esta configuración, la secreción pancreática se cuantifica midiendo la cantidad relativa de amilasa que se publicó después de la estimulación. Alternativamente, la secreción se pueden obtener imágenes en vivo por el uso de diferentessensores y colorantes.
La configuración ex vivo de acinos pancreáticos es ventajoso ya aislado acinos, que conservan muchas de las características del páncreas intactos, puede ser manipulado y controlado más fácilmente que en el animal entero 4-6. Esta configuración fue desarrollado originalmente en la década de 1970 y fue puesto prorrogado por el estudio de varios tejidos exocrinas, como las glándulas salivales y mamarias 3-7. En particular, permite el estudio de la secreción con un mínimo de interferencia a las complejas organizaciones celulares de estos epitelios polarizados.
Protocol
Representative Results
Discussion
Además del cultivo ex vivo, configuraciones alternativas para el estudio de la secreción exocrina incluyen microscopía intravital y medición de fluidos desde el conducto pancreático. Microscopía intravital se demostró que operar bien en el ratón glándulas salivales 10. Este método puede grabar la secreción en tiempo real en el animal intacto, pero está limitado en su resolución y por los medios para manipular el tejido exocrino. La evaluación de la secreción mediante la recopilación d…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por una beca de la BSF Estados Unidos e Israel a BS y EDSBS es un titular de la cátedra Hilda y Cecil Lewis en Genética Molecular.
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
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