Human Trophoblast primaire Culture cellulaire de modèle pour étudier les effets protecteurs de la mélatonine contre l&#39;hypoxie / perturbation induite par la réoxygénation-

Lucas Sagrillo-Fagundes; Hélène Clabault; Laetitia Laurent; Andrée-Anne Hudon-Thibeault; Eugênia Maria Assunção Salustiano; Marlène Fortier; Josianne Bienvenue-Pariseault; Philippe Wong Yen; J. Thomas Sanderson; Cathy Vaillancourt

doi:10.3791/54228

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Article de méthode

Human Trophoblast primaire Culture cellulaire de modèle pour étudier les effets protecteurs de la mélatonine contre l'hypoxie / perturbation induite par la réoxygénation-

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DOI :

10.3791/54228

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30 juillet 2016

Lucas Sagrillo-Fagundes^*¹ , Hélène Clabault^*¹ , Laetitia Laurent^*¹ , Andrée-Anne Hudon-Thibeault¹ , Eugênia Maria Assunção Salustiano¹ , Marlène Fortier¹ , Josianne Bienvenue-Pariseault¹ , Philippe Wong Yen¹ , J. Thomas Sanderson¹ , Cathy Vaillancourt¹

¹INRS-Institut Armand-Frappier

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce manuscrit présente un modèle in vitro unique de cellules cytotrophoblastes villositaires humaines immunopurifiées cultivées sous hypoxie/réoxygénation. Ce modèle est adapté pour étudier les effets protecteurs de traitements prometteurs, tels que la mélatonine, sur les complications de la grossesse associées à une augmentation du stress oxydatif et à une altération de la fonction placentaire.

Résumé

Ce protocole décrit comment les cellules cytotrophoblastes villeuses sont isolées à terme du placenta par digestions enzymatiques successives, suivies d’une centrifugation par densité, d’un isolement par gradient de milieu et d’une purification immunomagnétique. Comme observé in vivo, les cellules de cytotrophoblaste villeux mononucléées en culture primaire se différencient en cellules syncytiotrophoblastes multinucléées après 72 heures. Par rapport à la normoxie (8 %_O2), les cellules cytotrophoblastes villeuses qui subissent une hypoxie/réoxygénation (0,5 % / 8 %_O2) subissent un stress oxydatif accru et une apoptose intrinsèque, similaires à celles observées in vivo dans les complications de la grossesse telles que la prééclampsie, l’accouchement prématuré et le retard de croissance intra-utérin. Dans ce contexte, les trophoblastes villeux primaires cultivés dans des conditions d’hypoxie/réoxygénation représentent un système expérimental unique pour mieux comprendre les mécanismes et les voies de signalisation qui sont altérés dans le placenta humain et faciliter la recherche de médicaments efficaces qui protègent contre certains troubles de la grossesse. Les trophoblastes villeux humains produisent de la mélatonine et expriment ses enzymes et récepteurs synthétisants. La mélatonine a été suggérée comme traitement de la prééclampsie et du retard de croissance intra-utérin en raison de ses effets antioxydants protecteurs. Dans le modèle primaire de cellules cytotrophoblastes villeuses décrit dans cet article, la mélatonine n’a aucun effet sur les cellules trophoblastiques à l’état normoxique mais rétablit l’équilibre redox des cellules syncytiotrophoblastes perturbées par l’hypoxie/réoxygénation. Ainsi, les cellules trophoblastiques villeuses humaines en culture primaire constituent une excellente approche pour étudier les mécanismes à l’origine des effets protecteurs de la mélatonine sur la fonction placentaire pendant l’hypoxie/réoxygénation.

Introduction

Tout au long de la grossesse humaine, les cellules placentaires cytotrophoblaste, qui sont des cellules souches mononucléées, prolifèrent rapidement et se différencient en cellules soit de cytotrophoblaste villeux ou extravilleux. cytotrophoblastes extravillositaire envahissent et remodeler les artères spiralées de la paroi utérine. Cytotrophoblastes villeux, d'autre part, continuent à proliférer, se différencient et fusionnent pour former syncytiotrophoblaste multinucléés (le syncytium) ^1. Le maintien de l'homéostasie villous trophoblaste est essentiel pour le bien-être du fœtus et la grossesse en bonne santé. En fait, trophoblaste villeux permett....