Intraduktale Lieferung an die Kaninchen Brustdrüse

Summary

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Abstract

Lokalisierte intraductal Behandlungen für Brustkrebs bieten potentielle Vorteile, einschließlich effiziente Abgabe an den Tumor und reduzierte systemische Toxizität und Nebenwirkungen ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.} Allerdings bleiben einige Herausforderungen bevor diese Behandlungen in größerem Umfang angewandt werden. Die Entwicklung und Validierung von intraductal Therapeutika in einem geeigneten Tiermodell erleichtern die Entwicklung von intraductal therapeutische Strategien für die Patienten. Während die Mausbrustdrüse ist weithin als ein Modellsystem von Brustentwicklung und Tumorgenese verwendet wurde, ist die Anatomie des menschlichen gland verschieden. Ein größeres Tiermodell, wie das Kaninchen, kann als ein besseres Modell für Brustdrüsenstruktur und intraductal therapeutische Entwicklung dienen. in contrast an Mäuse, in denen zehn duktalen Bäume entlang der Körperachse räumlich verteilt, die jeweils in einem separaten Zitzen, mehr das Kaninchen Brustdrüse ähnelt dem menschlichen Drüse, mit mehreren überlappenden duktalen Systeme, die Ausfahrt durch separate Öffnungen in einer Zitze. Hier stellen wir minimal-invasive Methoden zur Abgabe von Reagenzien direkt in das Kaninchenbrustkanal und zur Visualisierung der Lieferung selbst mit hochauflösenden Ultraschallbildgebung.

Introduction

Die intraductal Abgabe therapeutischer Mittel hat in Tiermodellen und in einem frühen Stadium der Human – Studien ^{3, 4, 5, 6, 11, 12} untersucht worden. Eine aktuelle Studie der Phase I , die Sicherheit und Machbarkeit von intraductal Carboplatin oder intraductal pegyliertes liposomales Doxorubicin bei Frauen zeigten Mastektomie für die Behandlung von invasiven Krebs wartet ^2.

Vorangegangenen Protokolle für intraductal Lieferung wurden für Maus- und Ratten – Milchdrüsen ^{6, 7, 8, 9} entwickelt. Für Forschungszwecke intraductal Tumorzellinjektionen und den lentiviralen Vektor Lieferung von Onkogenen wurden auch in Tiermodellen durchgeführt wurdenref "> ^{13, 14, 15, 16.} ein Ideal de – vivo – Modell des intraductal Lieferprozesses sollte die Entwicklung neuer Klassen von therapeutischen Verbindungen erlauben jedoch und präklinischen Beurteilung erleichtern. Anatomische Unterschiede zwischen Nagern und Menschen die Übersetzung davon sind kompliziert Studien.

Im Gegensatz zu Mäusen, in dem jeder Kanal an einem separaten Zitzen endet, besteht die menschliche Brust von 5 bis 9 unabhängige duktalen Systeme, die jeweils eine separate Öffnung an der Zitze endet. Kaninchen Brustdrüsen beherbergen vier unabhängige duktalen Systeme, die jeweils separat zugänglich durch eine von vier Öffnungen in einem einzigen Zitze. Ein Kaninchen-Modell passt genauer die menschliche Anatomie und ermöglicht die Untersuchung von intraductal Arzneimittelabgabe in einem relevanten Kontext.

Hier verwenden wir zwei Techniken intraductal Lieferung zu beurteilen. Die gleichzeitige Verabreichung von aVitalfarbstoff ermöglicht die Visualisierung durch die Haut und ermöglicht eine einfache und rasche Bestätigung des Verfahrens. Für einige Anwendungen mit höherer Auflösung Mapping der Kanäle bevorzugt werden. Wir präsentieren hier ein Protokoll für die Ultraschall-Bildgebung der Kanäle durch die intraductal Lieferung eines nicht gezielten Kontrast Reagenz.

Protocol

Verfahren unter Verwendung von Versuchstieren wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee der University of Texas in Austin genehmigt. 1. Operationsvorbereitung Nehmen Sie das Körpergewicht eines jeden Kaninchens. Wie bei allen präklinischen Studien, Tiergewichte, überwacht regelmäßig die potenzielle Toxizität zu bewerten. Vor dem Kaninchen anesthetizing, füllen eine 50 ml konischen Röhrchen mit handelsüblichen Ultraschall-Gel und Spin bei 500 × …

Representative Results

Hier zeigen wir , dass die intraductal Abgabe von Kontrastreagenzien an die Milchgänge eines Kaninchens ohne Verletzung des Gewebes (Abbildung 2) erreicht werden. Bei Kaninchen, vier separate duktalen Systeme laufen an einer Zitze und somit zugegriffen werden kann und einzeln mit dieser Methode abgebildet. Einzelne duktalen Öffnungen sind leicht sichtbar gemacht; beachten Sie die Pfeilspitze eine zweite duktalen Öffnung neben dem kanülierten Kanal in 2B</stro…

Discussion

Diese Methode der intraductal Lieferung an die Kaninchenbrustdrüse kann für Ultraschallkontrastreagenzien und vielen anderen wässrigen Lösungen, einschließlich Vitalfarbstoffen und Therapeutika verwendet werden. Frühere Studien haben die intraductal Abgabe von Hormonen , ^{17, 18, 19} gezeigt. In Tiermodellen, die intraductal Lieferung von Nukleinsäuren ^8, Chemotherapeutika ^6,<…

Materials

MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Atropine Sulfate 0.5 mg/mL	Animal Health International	15320764	If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.
Ketamine HCL 100mg/mL	Animal Health International	21250699	http://www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20mg/mL	Animal Health International	20101547
Yohimbine 0.2mg/mL	Animal Health International	14588965
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 2100