Une procédure complète d’évaluer la Performance In Vitro de la néovascularisation Hémangioblastome putatif à l’aide de l’ellipsoïde test de germination
Summary
Cet article présente une procédure complète pour évaluer in vitro si angiogenèse tumorale classique existe dans les hémangioblastomes (HBs) et son rôle dans HBs. Les résultats soulignent la complexité de la néovascularisation-HB et suggèrent que cette forme courante d’angiogenèse est seulement un mécanisme complémentaire dans la néovascularisation-HB.
Abstract
L’inactivation du gène suppresseur tumeur von Hippel-Lindau (VHL) joue un rôle crucial dans le développement des hémangioblastomes (HBs) dans le système nerveux central (CNS) humain. Toutefois, tant l’origine cytologique et le processus évolutif d’HBs (y compris la néovascularisation) demeurent controversées, et anti-angiogènes pour VHL-HBs, basés sur le classique HB angiogenèse, donnent des résultats décevants dans les essais cliniques. Un obstacle majeur à la traduction clinique réussie du traitement anti-vasculaire est l’absence d’une compréhension approfondie de la néovascularisation dans cette tumeur vasculaire. Dans cet article, nous présentons une procédure complète pour évaluer in vitro si angiogenèse tumorale classique existe en HBs, ainsi que son rôle dans HBs. Avec cette procédure, les chercheurs peuvent précisément comprendre la complexité de la néovascularisation HB et identifier la fonction de cette forme courante de l’angiogenèse dans HBs. Ces protocoles peuvent être utilisés pour évaluer la thérapie anti-vasculaire plus prometteur pour les tumeurs, qui a fort potentiel translationnel pour traitement de tumeurs, ou pour aider dans l’optimisation du traitement anti-angiogénique de HBs à l’avenir les traductions. Les résultats soulignent la complexité de la néovascularisation HB et suggèrent que cette angiogenèse forme commune est uniquement un mécanisme complémentaire dans la néovascularisation HB.
Introduction
Hémangioblastomes (HBs) sont des tumeurs vasculaires bénignes que l’on trouve exclusivement dans le système nerveux central (CNS) humain. Ils se développent dans les patients avec la maladie de von Hippel-Lindau (VHL) ou lésions sporadiques. VHL-HBs sont difficiles à guérir grâce à un traitement chirurgical en raison de la récurrence fréquente et lésions multiples qui résultent de cette génétique trouble1. L’inactivation de la gène suppresseur de tumeur VHL a été considéré comme la cause première de la tumorigenèse de VHL-HBs, l’origine cytologique (y compris la néovascularisation) et le processus évolutif d’HBs restent largement controversée2. Par conséquent, une meilleure compréhension des mécanismes biologiques HB-néovasculaire peut fournir des indications utiles sur les stratégies anti-vasculaires les plus prometteuses pour VHL-HBs.
Une recherche récente a suggéré que HB-néovascularisation est semblable à la vasculogénèse embryologique3,4,5. Facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF) classique-médiation angiogenèse issus de l’endothélium vasculaire et qui est entraînée par la perte de fonction VHL a entraîné la prolifération et néovasculaire formation, qui a été mis au défi6. En 1965, Cancilla et Zimmerman constaté, au microscope électronique, HBs provenant de l’ endothélium7. Plus tard, il a été constaté que les cellules du stroma sont issues de vasoformative élément8. En 1982, Jurco et coll. ont découvert que les cellules du stroma sont d’origine endothéliale9. Donc, nous avons émis l’hypothèse que les cellules endothéliales vasculaires humaines sont les cellules d’origine de la néovascularisation-HB10. Bien qu’il soit préférable d’utiliser les cultures primaires de HB cellules dérivées des chirurgies patients VHL, nos recherches antérieures ont indiqué que les cultures primaires de HB ne sont pas stables, et des lignées cellulaires n’a pas peuvent être établie3. En outre, les cultures primaires dans l’environnement 3D ne pouvaient pas identifier l’origine cytologique de HB-la néovascularisation parce qu’elles incluent les progéniteurs des HB-vasculaire ingrédients10,11. Par conséquent, dans un modèle classique et primitif des cellules endothéliales, les cellules endothéliales vasculaires humaines (HUVEC) pourraient servir d’un autre modèle cellulaire pour HBs.
Le test de germination sphéroïde est un nouveau modèle en tissu technique12,13. Dans cet article, une 3D à base de collagène coculture système in vitro à l’aide de l’ellipsoïde test de germination a été développé, avec un objectif général est d’évaluer si l’angiogenèse tumorale classique existe en HBs, ainsi que son rôle dans HBs.
Protocol
Representative Results
Discussion
Récemment, plusieurs champs de recherche en biologie vasculaire ont été stimulées par l’étude de l’ endothélium d’angiogénique15. Dans cet article, nous avons développé un sphéroïde endothélial germination technique comme modèle expérimental pour étudier la formation de vaisseaux qui provient de la perte du gène VHL de fonction dans les cellules endothéliales manipulés pour identifier les molécules de nouveaux candidats de la cascade d’angiogénique. Au meilleur de notre c…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions de la Commission des sciences de Shanghai et de la technologie (15411951800, 15410723200). Les auteurs tiennent à remercier Prof. YuMei Wen et Prof. Chao Zhao de l’Université de département de microorganisme pathogène de Fudan pour leur assistance technique.
Materials
| human umbilical vein endothelial cell | Fudan IBS Cell Center | FDCC-HXN180 | |
| dulbecco’s modified eagle’s medium | Gibco | 11995040 | |
| fetal bovine serum | Gibco | 26400044 | |
| PLKO.1-puro vector | Addgene | #8453 | |
| packing plasmid psPAX2 | Addgene | #12260 | |
| envelope plasmid pMD2.G | Addgene | #12259 | |
| 3D round-bottom 96-well plates | S-Bio | MS-9096M | |
| matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | reduced serum medium |
| 15-well plate | Ibidi | 81501 | Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight |
| endothelial cell growth supplements | Sciencell | #1052 | |
| 10-cm culture dish | Corning | Scipu000813 | |
| Puromycin | Gibco | A1113802 | |
| typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
| Automated Cell Counter System | BioTech | ||
| Image Analysis software | Winmasis | http://mywim.wimasis.com |
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