분석 결과 돋 아 회전 타원 체를 사용 하 여 상 상속 Hemangioblastoma Neovascularization의 생체 외에서 성능을 평가 하는 포괄적인 절차
Summary
이 종이 여부를 평가 체 외에 고전적인 종양 신생 hemangioblastomas (HBs)와 HBs에서의 역할에 있는 포괄적인 절차를 제공 합니다. 결과 HB neovascularization의 복잡성을 강조 하 고는 것이 좋습니다이 일반적인 형태의 신생 HB neovascularization만 보완 메커니즘.
Abstract
폰 Hippel Lindau (VHL) 종양 억제기 유전자의 비활성화 인간 중앙 신경 시스템 (CNS) 내에서 hemangioblastomas (HBs)의 개발에 중요 한 역할을 하고있다. 그러나, cytological 근원 그리고 HBs (neovascularization 포함)의 진화 과정 남아 논란, 그리고 안티-신생 VHL-HBs, 고전적인 HB 신생에 기반에 대 한 임상 시험에서 실망 스러운 결과 생산 했습니다. 반대로 혈관 치료의 성공적인 임상 번역 한 주요 장애물이 neovascularization 혈관이 종양에의 한 철저 한 이해의 부족 이다. 이 문서에서는, 우리가 여부를 평가 체 외에 고전적인 종양 신생 HBs, HBs의 역할에 있는 포괄적인 절차 제시. 이 절차와 연구원 수 정확 하 게 HB neovascularization의 복잡성을 이해 하 고이 일반적인 형태의 HBs에 신생의 함수를 식별. 이러한 프로토콜 있는 잠재력이 높은 변환 종양 치료 또는 HBs에 대 한 안티-신생 치료의 최적화에 돕고 미래에 번역에 대 한 종양을 위한 가장 유망한 항 혈관 치료를 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. 결과 HB neovascularization의 복잡성을 강조 하 고는 것이 좋습니다이 일반적인 양식 신생 HB neovascularization만 보완 메커니즘.
Introduction
Hemangioblastomas (HBs)는 독점적으로 인간 중앙 신경 시스템 (CNS) 내에서 발견 되는 양성 혈관 종양. 그들은 폰 Hippel Lindau (VHL) 질병 또는 산발적 병 변 환자에서 개발. VHL HBs 빈번한 재발으로 인해 수술 치료를 통해 치료 하기 어려운 고 발생이 유전자 여러 병 변 장애1. VHL 종양 억제기 유전자의 비활성화 VHL HBs tumorigenesis의 근본 원인을 고려 하고있다, 비록 HBs의 진화 과정과 cytological 근원 (를 포함 하 여 neovascularization) 크게 논란이2남아 있다. 따라서, HB-신생 생물 학적 메커니즘의 더 나은 이해 VHL HBs에 대 한 가장 유망한 항 혈관 전략에 유용한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
최근 연구는 건의 HB neovascularization가 vasculogenesis3,,45와 비슷합니다. 고전적인 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF)-중재 신생 혈관 내 피에서 유래 하 고 그 기능의 VHL 손실에 의해 구동 됩니다 확산 귀착되 고 신생 형성 되었습니다 도전6. 1965 년, Cancilla와 짐머만, 전자 현미경 검사 법, HBs endothelium7에서 유래를 사용 하 여. 나중 stromal 세포 vasoformative 요소8에서 파생 됩니다 발견 했다. 1982 년에, Jurco 그 외 여러분 발견 stromal 세포 내 피 기원9. 따라서, 우리는 인간의 혈관 내 피 세포는 HB neovascularization10의 원래 세포 가설. HB 셀 VHL 환자 수술에서 파생 된에서 기본 문화권을 사용 하는 것이 낫다, 비록 우리의 이전 연구 표시는 HB에서 주 문화는, 셀 라인 설립된3수 없습니다. 또한, 3D 환경에서 주 문화는 HB 혈관 재료10,11의 창시자를 포함 하기 때문 HB neovascularization cytological 원산지를 식별 하지 수 없습니다. 따라서, 내 피 세포의 원시적이 고 고전적인 모델 인간의 혈관 내 피 세포 (HUVEC) 대체 세포 모델 HBs에 대 한 될 수 있습니다.
회전 타원 체 돋 아 분석 결과 조직 공학12,13에 새로운 모델입니다. 이 문서에는 3D 콜라겐 기반의 coculture 시스템에서 생체 외에서 분석 결과 돋 아 회전 타원 체를 사용 하 여 개발 되었다, 고전적인 종양 신생 HBs, HBs의 역할에 있는지 여부를 평가 하는 전반적인 목표.
Protocol
Representative Results
Discussion
최근, 혈관 생물학 연구의 여러 분야는 신생 endothelium15의 연구에 의해 자극 되었다. 이 문서에서는, 우리는 내 피 회전 타원 체의 소설 후보 분자 식별 하 조작 내 피 세포에서 기능의 VHL 유전자의 손실에서 유래 혈관 형성을 연구 하는 실험 모델 기법을 돋 아 개발에 신생 캐스케이드입니다. 우리의 지식 최선을이 endogenic 수정 된 내 피 세포의 신생 효과 검사 하는 첫 번째 보고서 …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 상하이 과학 위원회 및 기술 (15411951800, 15410723200)에서 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자 교수 YuMei 원 및 그들의 기술 지원에 대 한 병원 성 미생물과 복 단 대학 교수 차오 Zhao 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| human umbilical vein endothelial cell | Fudan IBS Cell Center | FDCC-HXN180 | |
| dulbecco’s modified eagle’s medium | Gibco | 11995040 | |
| fetal bovine serum | Gibco | 26400044 | |
| PLKO.1-puro vector | Addgene | #8453 | |
| packing plasmid psPAX2 | Addgene | #12260 | |
| envelope plasmid pMD2.G | Addgene | #12259 | |
| 3D round-bottom 96-well plates | S-Bio | MS-9096M | |
| matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | reduced serum medium |
| 15-well plate | Ibidi | 81501 | Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight |
| endothelial cell growth supplements | Sciencell | #1052 | |
| 10-cm culture dish | Corning | Scipu000813 | |
| Puromycin | Gibco | A1113802 | |
| typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
| Automated Cell Counter System | BioTech | ||
| Image Analysis software | Winmasis | http://mywim.wimasis.com |
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